Hamowanie autofagii zwiększa apoptozę indukowaną terapią w modelu chłoniaka indukowanym przez Myc ad 6

W leczeniu ludzkich chłoniaków, leki alkilujące, takie jak cyklofosfamid, służą jako terapia pierwszego rzutu (27-29). W celu określenia, czy hamowanie autofagii może zwiększyć skuteczność alkilującego leku w nowotworach opornych na apoptozę, myszom z chłoniakami Myc / p53ERTAM podawano cyklofosfamid sam lub w połączeniu z CQ. Myszy z Myc / p53ERTAM chłoniakami traktowano pojedynczą dawką 50 mg / kg cyklofosfamidu ip, a następnie traktowano PBS lub 60 mg / kg / dzień CQ ip Leczenie PBS lub CQ powtarzano codziennie przez 13 dni (Figura 7A). Cyklofosfamid z lub bez CQ doprowadził do całkowitej regresji guza u wszystkich leczonych myszy. Cotreatment CQ znacznie poprawił regresję guza i opóźnił nawrót guza. Średnia objętość guza po 24 godzinach traktowania zwierząt traktowanych cyklofosfamidem / PBS i traktowanych cyklofosfamidem / CQ wynosiła 2,966. 673 mm3 i 1,489. 524 mm3, odpowiednio (P <0,001). Dodanie CQ do cyklofosfamidu zwiększyło ponad dwukrotnie średni czas do nawrotu nowotworów. Nowotwory myszy leczonych PBS (Figura 5) powróciły po średnio 4,1. 1,2 dni, podczas gdy ograniczony kurs leczenia CQ opóźniał nawrót guza średnio o 9,3. 3,5 dnia (P <0,01) (Figura 7B). Figura 7 Wpływ chemioterapii alkilującej zi bez CQ w Myc / p53ERTAM chłoniaki. (A) Komórki pierwotnego guza zebrano i pasażowano in vivo w syngenicznych myszach C57BL / 6 × 129F1. Komórki Myc / p53ERTAM wstrzyknięto podskórnie bokom myszy. Gdy nowotwory osiągnęły ponad 1700 mm3, myszy dopasowano do wielkości guza i potraktowano 50 mg / kg cyklofosfamidu ip raz, a następnie codziennie PBS ip (górny panel) lub 60 mg / kg / dzień CQ ip (dolny panel) dla łącznie 13 dni. Dzienne objętości guza są wyświetlane dla poszczególnych myszy. CY, cyklofosfamid. (B) Czas do nawrotu nowotworu u myszy leczonych cyklofosfamidem / PBS- i cyklofosfamidem / CQ (średnia . SD). * P = 0,003. (C) Fluorescencja GFP-LC3. Zielony, GFP-LC3; niebieski, DAPI. Ogromna populacja pierwotnych komórek chłoniaka Myc / p53ERTAM o stabilnej ekspresji białka fuzyjnego GFP-LC3 była traktowana 50. M MNNG z lub bez 10. M CQ. Pożywkę do hodowli komórek zmieniano codziennie. Komórki utrwalono i zobrazowano przy użyciu mikroskopii fluorescencyjnej po 24 i 48 godzinach. Przedstawiono reprezentatywne obrazy komórek po 48 godzinach. (D) Kwantyfikacja odsetka komórek z więcej niż 4 punktami GFP-LC3 na komórkę (punktowane) w porównaniu z punktami z mniej niż 4 punktami GFP-LC3 na komórkę (dyfuzyjną) w 24 i 48 godzin po leczeniu. (E) MNNG z i bez traktowania CQ w komórkach HC i shATG5. W dniu 0, 2 x 106 komórek / ml komórek chłoniaka HC, h2 i h7 wysiano i traktowano 20 (M MNNG (czerwony) lub 20. M MNNG plus 5. M CQ (niebieski). Żywą liczbę komórek określoną przez wykluczenie błękitem trypanowym policzono po 24 godzinach i 48 godzinach leczenia. Zgłoszone wartości to środki. SD z trzech próbek reprezentatywnego doświadczenia. Aby zbadać wpływ chemioterapii alkilującej na autofagię, komórki Myc / p53ERTAM eksprymujące GFP-LC3 potraktowano czynnikiem alkilującym N-metylo-N3-nitro-N-nitrozoguanidyną (MNNG) zi bez CQ (figura 7C). MNNG jest czynnikiem alkilującym, który może indukować apoptozę w sposób niezależny od p53 (30). Leczenie CQ lub samo traktowanie MNNG skutkowało zwiększeniem odsetka żywotnych komórek z punktową fluorescencją LC3, co wskazuje na akumulację autofagosomów. Leczenie skojarzone z MNNG i CQ dało 9-krotny i 17-krotny wzrost punktowej fluorescencji LC3 w porównaniu z kontrolą DMSO w 24- i 48-godzinnych punktach czasowych (Figura 7D). Aby dodatkowo porównać efekt autofagii genetycznej hamowania z efektem CQ po terapii cytotoksycznej, zbadano wpływ traktowania MNNG zi bez CQ w komórkach HC, h2 i h7. Po 24 i 48 godzinach, skojarzone leczenie z 5 (3 M CQ znacząco zwiększyło cytotoksyczne działanie traktowania MNNG komórek chłoniaka HC w stopniu podobnym do traktowania komórek h2 lub h7 samym MNNG. Traktowanie CQ nie zwiększało jeszcze śmierci komórek indukowanej przez czynnik alkilujący w komórkach h2 lub h7 (Figura 7E). Dyskusja Wyniki opisane w tym badaniu dostarczają dowodów, że autofagia może być mechanizmem adaptacyjnym, który przyczynia się do przeżycia komórek nowotworowych i odporności na apoptozę indukowaną terapią. Indukcja p53 w kościach Mycp53ERTAM powoduje indukcję apoptozy komórek nowotworowych, a komórki nowotworowe, które przeżywają ostrą indukcję apoptozy indukowanej przez p53, wykazują aktywną autofagię. Upośledzenie autofagicznego usuwania pęcherzyków przez Cys lizosotropowy korelowało ze wzmocnioną apoptozą i regresją nowotworu, a także opóźnionym nawrotem guza [patrz też: koszulki ratownik medyczny, rehabilitacja po zerwaniu ścięgna achillesa, koszt ubezpieczenia zdrowotnego ] [podobne: szpital dziecięcy lublin chodźki, emedlink, koszulki ratownik medyczny ] [hasła pokrewne: szpital dziecięcy lublin chodźki, emedlink, koszulki ratownik medyczny ]