Hamowanie autofagii zwiększa apoptozę indukowaną terapią w modelu chłoniaka indukowanym przez Myc ad 9

Chemiczna struktura pochodnych CQ pozwala im służyć jako słabe zasady, które zostają uwięzione w kwaśnych przedziałach. Ponieważ guzy glikolityczne są charakterystycznie bardziej kwasowe niż otaczająca normalna tkanka (52), pochodne CQ mogą preferencyjnie gromadzić się w tkance nowotworowej i wykazywać większą skuteczność w hamowaniu autofagii w guzie w porównaniu do normalnej tkanki. Ogólnoustrojowe podawanie CQ w dawkach mniej więcej równoważnych dawkom stosowanym w leczeniu malarii lub reumatoidalnego zapalenia stawów było dobrze tolerowane przez myszy do 20 dni. Chociaż doniesiono, że CQ ma wiele dodatkowych efektów komórkowych oprócz zdolności do hamowania autofagii, zdolność niskich dawek CQ do wzmacniania apoptozy indukowanej p53 była zależna od jej wpływu na autofagię. Podczas gdy shRNA ATG5 niezależnie zwiększał indukowaną przez p53 śmierć komórek, nie obserwowano dalszego zwiększenia śmierci komórki, gdy komórki nowotworowe wyrażające shRNA ATG5 były traktowane niskimi dawkami CQ. Jednak przy wysokich dawkach (10. M lub więcej), leczenie CQ może mieć efekty niezależne od autofagii (Suplementalna Figura 1). Chociaż pochodne CQ, takie jak HCQ w maksymalnie tolerowanych dawkach, mogą osiągnąć szczytowe stężenie we krwi zbliżone do 10 .M, liczne badania farmakokinetyczne HCQ jako pojedynczego czynnika w standardowych dawkach stosowanych w reumatoidalnym zapaleniu stawów ustaliły, że stężenia w stanie stacjonarnym we krwi są w zakresie 2. 3. M (53, 54). Łącznie dane te dostarczają uzasadnienia dla dalszego badania schematów skojarzonych, w tym pochodnych CQ i systemowej chemioterapii i / lub promieniowania, w celu zwiększenia skuteczności terapeutycznej istniejących terapii przeciwnowotworowych. Dane sugerują, że opracowanie bardziej specyficznych inhibitorów autofagii może być korzystne klinicznie, jeśli można je wykorzystać w połączeniu ze środkami indukującymi apoptozę. Metody Generowanie guzów i izolacja tkanek. Wszystkie doświadczenia przeprowadzono zgodnie z zatwierdzonymi protokołami bezpieczeństwa zwierząt. Zatwierdzenie opieki nad zwierzętami i ich wykorzystania w tych eksperymentach zostało dostarczone przez Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) na University of Pennsylvania. Myszy p53ERTAM / p53ERTAM zostały stworzone przez MA Christophorou, D. Martina-Zanca (BRI-Basic Research Program, National Cancer Institute -Frydick Cancer Research Facility, Bethesda, Maryland, USA) i GI Evan. Wszystkie doświadczenia przeprowadzono za pomocą myszy C57BL / 6 × 129F1 od 8 do 10 tygodni otrzymanych z The Jackson Laboratory. Pobieranie komórek szpiku kostnego i wytwarzanie nowotworów wywodzących się ze szpiku kostnego odbywało się zgodnie z wcześniej opisanym protokołem (16). Po pierwotnym utworzeniu guza komórki nowotworowe zebrano w lodowatym PBS przechodzącym przez siatkę nylonową o rozmiarze 70 .m (BD Biosciences) i rozprężono in vivo przez wstrzyknięcie podskórne bokom syngenicznych myszy. W celu analizy tkanek wszystkie zwierzęta uśmiercono indywidualnie poprzez uduszenie CO2 i natychmiast zebrano tkankę. Guzy zebrano w lodowatym PBS. Dla każdego guza sekcje wizualnie żywej tkanki nowotworowej utrwalano w 10% formalinie w celu przygotowania skrawków zatopionych w parafinie i aldehydu glutarowego do mikroskopii elektronowej (patrz poniżej). Lizaty komórek nowotworowych uzyskano poprzez ręczne poruszanie pozostałej tkanki nowotworowej w buforze RIPA. Podawanie leków i pomiary guza. W leczeniu TAM proszek hormonu (Sigma-Aldrich) zdyspergowano, przez sonikację, w oleju arachidowym (Sigma-Aldrich) w stężeniu 10 mg / ml. Podawanie TAM odbywało się poprzez codzienne iniekcje ip w dawce mg na mysz. CQ (Sigma-Aldrich) i HCQ (Spectrum Chemicals Ltd.) rozpuszczono w PBS i podawano dootrzewnowo Do badań in vitro CQ rozpuszczono w PBS. hTAM (Sigma-Aldrich) rozpuszczono w etanolu. Cyklofosfamid (Sigma-Aldrich) rozpuszczono w PBS. MNNG (Sigma-Aldrich) rozpuszczono w DMSO. Pirogronian metylu rozcieńczono w PBS (Sigma-Aldrich). W doświadczeniach z traktowaniem komórek MNNG in vitro komórki ponownie zawieszono w RPMI zawierającym 10% FBS we wskazanych lekach i inkubowano w 37 ° C przez 15 minut. Komórki odwirowano i ponownie zawieszono w świeżej pożywce z LPS i IL-7 w odpowiednich dawkach. CQ jak wskazano. Komórki ponownie traktowano w ten sposób codziennie. Guzy mierzono codziennie, stosując suwmiarki, a objętość guza obliczano według następującego wzoru: (mm3) = A × B × [(A + B) / 2]. A i B były największymi pomiarami odpowiednio długości i szerokości dla każdego nowotworu. Hodowlę komórkową. W doświadczeniach in vitro, pierwotny guz Myc / p53ERTAM zebrano w zimnym PBS, a komórki nowotworowe naciągnięto przez siatkę nylonową 70 .m (BD Biosciences) w celu wyizolowania objętościowej populacji komórek nowotworowych.
[przypisy: tabliczka mnożenia na czas, koszulki ratownictwo medyczne, dieta przy dnie moczanowej tabela ]
[przypisy: octenisept ulotka, koszulki ratownictwo medyczne, tobrosopt dex ]
[więcej w: octenisept ulotka, koszulki ratownictwo medyczne, tobrosopt dex ]