Hamowanie autofagii zwiększa apoptozę indukowaną terapią w modelu chłoniaka indukowanym przez Myc ad

Po okresie opóźnienia nowotworu 100% zwierząt doświadczyło nawrotu guza pomimo ciągłego leczenia TAM. W niniejszym badaniu CQ znacznie poprawiło regresję guza i opóźniło nawrót guza po aktywacji p53 lub podaniu chemioterapii cytotoksycznej. Autofagia była aktywowana w komórkach nowotworowych, które przeżyły apoptozę po stresie terapeutycznym. Leczenie CQ przy niskich dawkach mikromolowych hamowało zależne od autofagii przeżycie komórek nowotworowych, a jego efekty były podobne do efektów genetycznego knockdown podstawowego genu autofagii ATG5 w zwiększaniu indukowanej przez p53 śmierci komórek apoptotycznych. Łączenie CQ w tych dawkach z krótkim RNA o strukturze spinki do włosów (shRNA) przeciwko ATG5 nie zwiększało jeszcze poziomu śmierci komórek po aktywacji p53. Badanie to dostarcza dowodów na to, że komórki nowotworowe mogą przetrwać apoptozę indukowaną terapią poprzez proces autofagii i dostarcza uzasadnienia dla dalszych badań nad inhibitorami autofagii jako wzmacniaczami środków przeciwnowotworowych. Wyniki Regresja guza indukowana przez p53 jest zwiększona przez CQ. Gen fuzyjny p53ERTAM składa się z transkrypcyjnie nieaktywnego regionu wiążącego hormony ER (ERTAM) (14) połączonego z całym regionem kodującym genu supresorowego guza Trp53 (15). U myszy homozygotycznych pod względem knockin alleli kodujących p53ERTAM (Trp53KI / KI), ekspresja genów zależnych od p53 jest indukowana przez układowe podawanie TAM (13). W celu wytworzenia chłoniaków z komórek B, komórki szpiku kostnego zebrano od myszy Trp53KI / KI i transdukowano in vivo retrowirusem LMycSN, jak opisano wcześniej (16, 17). W celu zbadania przeciwnowotworowego działania in vivo po traktowaniu CQ w nieobecności aktywacji p53, komórki nowotworowe zebrano z chłoniaka Myc / p53ERTAM i wstrzyknięto podskórnie do boków syngenicznych myszy. Po utworzeniu guza myszy dopasowano do objętości guza i losowo przydzielono do otrzymania PBS lub 60 mg / kg / dzień CQ ip (Figura 1A). Ta dawka jest zbliżona do wcześniej podanego LD50 wynoszącego 68. 78 mg / kg (18). Myszy leczone w tych dawkach nie miały zaobserwowanej toksyczności. Traktowanie CQ ip w dawce 60 mg / kg / d powodowało niewielkie, ale powtarzalne, osłabienie tempa wzrostu guza w porównaniu z kontrolami PBS. Jednakże u żadnego ze zwierząt leczonych CQ nie obserwowano regresji nowotworu. Codzienne leczenie pochodną hydroksychlorochinonu CQ (HCQ) w dawce 60 mg / kg / dobę powodowało podobne osłabienie wzrostu guza (dane nie pokazane). Rycina Wpływ CQ zi bez aktywacji p53 na regresję chłoniaków Myc / p53ERTAM. (A) CQ osłabia wzrost guza. Komórki pierwotnego nowotworu Myc / p53ERTAM zebrano i pasażowano in vivo w 6 syngenicznych myszach C57BL / 6 × 129F1. Komórki wstrzyknięto podskórnie bokom myszy. Gdy nowotwory osiągnęły objętość większą niż 1000 mm3, myszy przypisano do dziennego PBS ip lub 60 mg / kg / dzień CQ ip. Wyniki przedstawiono jako średnie. SD dziennie objętości guza i są reprezentatywne dla wielu eksperymentów. * P <0,05. (B) CQ opóźnia nawrót guza po wywołanej przez p53 regresji guza. Komórki Myc / p53ERTAM wstrzyknięto podskórnie do boków 18 myszy C57BL / 6 × 129F1. Gdy nowotwory osiągnęły objętość większą niż 1500 mm3, myszy przypisano do codziennego leczenia (strzałka) za pomocą mg / dzień TAM ip plus roztwór soli (TAM / PBS) lub mg / dzień TAM ip plus 60 mg / kg / dzień CQ ip (TAM / CQ). Przedstawione wyniki to codzienne objętości guza (średnia . SD) dla każdej grupy z reprezentatywnego eksperymentu. * P <0,05; ** P <0,005. W celu określenia wpływu leczenia CQ po terapeutycznej aktywacji apoptozy, wytworzono chłoniaki Myc / p53ERTAM i myszy dopasowano do objętości guza i losowo przypisano do otrzymywania zarówno dziennego TAM plus PBS ip (TAM / PBS) lub dziennego TAM plus 60 mg / kg / d CQ ip (TAM / CQ). Terapia TAM doprowadziła do lokalizacji jądrowej białka fuzyjnego p53ERTAM i szybkiej indukcji apoptozy (dane nie pokazane). Guzy leczone TAM / PBS ulegały regresji w ciągu kilku dni, ale wszystkie nowotwory wznowiły wzrost pomimo kontynuacji terapii TAM. Leczenie TAM / CQ spowodowało znaczące opóźnienie w nawrocie guza w porównaniu z leczeniem TAM / PBS (Figura 1B). W oddzielnych doświadczeniach, 60 mg / kg / dzień ip HCQ również powodowało znaczny opóźniony nawrót (dane nie pokazane). U wszystkich myszy leczonych w trakcie 4 oddzielnych eksperymentów całkowitą kliniczną regresję guza w odpowiedzi na leczenie zaobserwowano u 81% myszy leczonych TAM / CQ lub TAM / HCQ w porównaniu z 8% myszy leczonych TAM / PBS (P <0,005). Autofagia jest aktywowana w komórkach nowotworowych, które przeżywają zależną od p53 apoptozę. Aktywacja autofagii po stresie onkogennym lub chemioterapeutycznym obserwowano w wielu liniach komórkowych raka (11, 14). [przypisy: koszt ubezpieczenia zdrowotnego, co dziś zjem na śniadanie, street workout plan treningowy ] [patrz też: koszulki ratownictwo medyczne, tobrosopt dex, koprolalia ] [patrz też: koszulki ratownictwo medyczne, tobrosopt dex, koprolalia ]