Hamowanie autofagii zwiększa apoptozę indukowaną terapią w modelu chłoniaka indukowanym przez Myc cd

Aby lepiej zrozumieć wpływ aktywacji CQ i / lub p53 na autofagię komórek nowotworowych w tym modelu nowotworu, wykonano mikroskopię elektronową na tkance chłoniaka otrzymanej od myszy leczonych PBS lub 60 mg / kg / dzień CQ ip w nieobecności aktywacji p53. i od myszy traktowanych TAM / PBS lub TAM / CQ w sekwencyjnych punktach czasowych po aktywacji p53. Podczas gdy komórki zawierające rzadkie autofagosomy znaleziono w nowotworach traktowanych PBS, komórki nowotworowe z wieloma autofagosomami łatwo zwizualizowano w guzach Myc / p53ERTAM leczonych CQ przez 96 godzin w nieobecności aktywacji p53 (Figura 2A). CQ zaburza strukturę i funkcję lizosomu (19), zapobiegając skutecznej degradacji autofagicznej, prowadząc do akumulacji nieefektywnych autofagosomów (11, 20, 21). Osiem godzin po pierwszym podaniu TAM, aktywacja p53 wywołała zmiany morfologiczne charakterystyczne dla apoptozy w większości komórek nowotworowych, w tym kondensację chromatyny, pęcherzyki jądrowe i cytoplazmatyczne oraz fragmentację jądrową. Koncentrując się na komórkach z nienaruszoną morfologią jądrową i błonami cytoplazmatycznymi, zidentyfikowano liczne komórki nowotworowe w guzach z obu grup, które przeżyły apoptozę indukowaną przez p53. W komórkach nieapoptotycznych leczenie TAM / PBS spowodowało pojawienie się dużych pęcherzyków podwójnej błony przez 24 godziny i 48 godzin. W ciągu 48 godzin większość komórek nowotworowych miała mniejsze resztkowe autofagosomy, ponieważ guzy zaczęły się powtarzać. Przeciwnie, żywotne komórki nowotworowe w guzach traktowanych TAM / CQ gromadziły autofagosomy w 8 godzin po aktywacji p53, a przez 24 godziny, żywe komórki nowotworowe były mniej liczne i zawierały wiele nieskutecznych autofagosomów z nierozłożonymi lub częściowo zdegradowanymi treściami. W ciągu 48 godzin nowotwory leczone TAM / CQ składały się głównie z resztek komórek apoptotycznych. Figura 2 Wpływ aktywacji p53 zi bez CQ na akumulację autofagosomalną. (A) Przebieg w czasie zmian w autofagosomach podczas regresji guza. Mikrografy elektronowe tkanek chłoniaka zebrano po 96 godzinach samego PBS lub CQ i po 8 godzinach, 24 godzinach i 48 godzinach po rozpoczęciu leczenia TAM. Strzały, pęcherzyki podwójnej błony. Paski skali: 2 m. Oryginalne powiększenie, × 10 000. (B) Kwantyfikacja komórek nowotworowych ze zwiększonymi autofagosomami. Mikroskopię elektronową wykonano na chłoniakach Myc / p53ERTAM we wskazanych punktach czasowych pod podanymi protokołami leczenia. Liczbę autofagosomów na komórkę nieapoptotyczną określono w sposób opisany w metodach (średnia . SD). * P <0,005. Kwantyfikacja liczby autofagosomów na komórkę nieapoptotyczną (Figura 2B) wykazała, że sama aktywacja p53 (TAM / PBS) spowodowała 8-krotny wzrost liczby autofagosomów w porównaniu z nowotworami traktowanymi samym PBS o 24 godziny po rozpoczęciu TAM. leczenie. Pojawienie się licznych autofagosomów wystąpiło wcześniej w guzach leczonych TAM / CQ. Zarówno pod nieobecność aktywacji p53, jak i w każdym punkcie czasowym po aktywacji p53, leczenie CQ spowodowało znaczący wzrost liczby autofagosomów na komórkę nieapoptotyczną. Leczenie CQ wzmacnia apoptozę indukowaną przez p53. Niewielkie powiększenie (4 000) mikrografii elektronowej guzów leczonych samym PBS w porównaniu z nowotworami traktowanymi TAM / PBS lub TAM / CQ po 48 godzinach od rozpoczęcia leczenia TAM wykazało powszechną śmierć komórek w guzach traktowanych TAM / CQ (Figura 3A) . Morfologiczne cechy apoptozy zaobserwowano w mikroskopie elektronowym w 92%. 5% komórek nowotworowych w guzach leczonych TAM / CQ w porównaniu z 3%. 3% komórek nowotworowych w guzach leczonych TAM / PBS (Figura 3B). Aby dodatkowo scharakteryzować tę śmierć komórki, barwienie TUNEL przeprowadzono na próbkach nowotworu w celu oceny liczby komórek poddawanych apoptozie w leczonych nowotworach (Figura 3C). W 8 godzin po rozpoczęciu leczenia zarówno TAM / PBS, jak i TAM / CQ skutkowały wyraźnym wzrostem komórek nowotworowych TUNEL-dodatnich w porównaniu z nowotworami traktowanymi PBS i CQ. Liczba komórek TUNEL-dodatnich zmniejszyła się o 48 godzin w traktowanych TAM / PBS, ale nie w guzach leczonych TAM / CQ. Kwantyfikacja procentu komórek TUNEL-pozytywnych w polu o dużej mocy w leczonych nowotworach (Figura 3C) nie wykazała istotnych różnic w odsetku komórek TUNEL-dodatnich między guzami traktowanymi PBS i CQ oraz między TAM / PBS i TAM / CQ leczonych nowotworów po 8 godzinach. Po 24 godzinach zaobserwowano znacznie większy odsetek komórek nowotworowych TUNEL-dodatnich w guzach leczonych TAM / CQ w porównaniu z guzami leczonymi TAM / PBS. Ta różnica utrzymywała się po 48 godzinach, gdy 7-krotna różnica w odsetku komórek nowotworowych z TUNEL-dodatnim była obserwowana w guzach leczonych TAM / CQ w porównaniu z guzami leczonymi TAM / PBS (P <0,001). [więcej w: zdrowa żywność zdrowy styl życia, rehabilitacja po zerwaniu ścięgna achillesa, koszulka ratownictwo medyczne ] [patrz też: sebidin plus, koszulka ratownictwo medyczne, jaskółcze ziele zastosowanie ] [przypisy: sebidin plus, koszulka ratownictwo medyczne, jaskółcze ziele zastosowanie ]