IL-33 i ST2 obejmują krytycznie indukowany biomechanicznie i kardioprotekcyjny układ sygnalizacyjny ad 8

Ponadto zaobserwowaliśmy, że PMA powodowało zależną od dawki, silną indukcję zarówno ekspresji białka sST2, jak i IL-33, z zależnym od dawki spadkiem wolnej IL-33. To dodatkowo potwierdza koncepcję sekwestracji IL-33 związanej z sST2, która może zmniejszać fizjologiczną aktywność IL-33 na komórkach poprzez działanie wabika sST2. Chociaż nasze dane są zgodne z kardioprotekcyjną sygnalizacją IL-33 i hamowaniem kardioprotekcji przez sST2 jako receptora wabika, możliwe jest również, że sST2 może służyć jako rezerwuar dla IL-33. Ten scenariusz został opisany dla rozpuszczalnego receptora IL-6 (40). Zatem sST2 może działać jako więcej niż inhibitor sygnalizacji ST2L. Szczegółowa charakterystyka względnych powinowactw wiązania natywnego sST2 i ST2L dla IL-33 nie została jeszcze wykonana. Ta charakterystyka będzie ważna dla przyszłego zrozumienia roli określonych poziomów sST2 jako receptora wabika. Rozpuszczalne receptory IL mogą mieć znacznie niższe powinowactwo z tym samym ligandem w porównaniu z izoformami związanymi z błoną (41), a zatem znaczny nadmiar sST2 może być niezbędny do hamowania sygnalizacji IL-33 przez ST2L. Chociaż te dane pokazują, że komórki mięśnia sercowego wyrażają IL-33 i że sygnalizacja IL-33 może być kardioochronna, eksperymenty te nie wykluczają roli ekspresji IL-33 lub sST2 przez komórki inne niż sercowe, w tym leukocyty. Wystąpił niewielki wzrost wiązania NF-kB w komorach ST2. /. myszy traktowane IL-33. Chociaż nasze dane ogólnie nie sugerują żadnego działania IL-33 w nieobecności ST2, nie można jednoznacznie wykluczyć możliwości innej funkcji IL-33, innej niż wiązanie z ST2. Wreszcie, możliwe jest, że sST2 jest nie tylko biomarkerem o złym wyniku, ale także prawdziwym patofizjologicznym mediatorem postępu choroby. Ta hipoteza będzie wymagać dalszego zbadania ilościowych związków pomiędzy poziomem sST2 w surowicy a sygnaturą parakrynną IL-33. Metody Wszystkie odczynniki pochodzą z firmy Sigma-Aldrich, w przeciwnym razie należy je zauważyć. Eksprymowaliśmy i oczyszczano białka IL-33 dla wszystkich eksperymentów opisanych przy użyciu chromatografii powinowactwa, jak opisano w Produkcji rekombinowanego szczurzego i ludzkiego białka IL-33 i poliklonalnego przeciwciała przeciw szczurzej IL-33. ST2. /. myszy. Ukierunkowane myszy z przerwaniem ST2 utrzymywano na tle 129 x C57BL / 6, jak opisano wcześniej (18). Wszystkie procedury na zwierzętach zostały przeprowadzone zgodnie z wytycznymi opublikowanymi w przewodniku NIH dotyczącym opieki nad zwierzętami laboratoryjnymi i zostały zatwierdzone przez Stały Komitet ds. Zwierząt Harvard Medical School. Hodowla komórkowa i cykliczne obciążenie mechaniczne. Hodowlę komórek szczurzych kardiomiocytów szczura i fibroblastów serca przeprowadzono jak opisano uprzednio (42, 43). Pokrótce, serca od do 3-dniowych szczurzych noworodków Sprague-Dawley (Charles River Laboratories) strawiono trypsyną (1 mg / ml, Invitrogen) i kolagenazą II (0,8 mg / ml; Worthington Biochemical Corp.) i powleczono na niepowlekanych naczyniach hodowlanych przez 1,5 godziny. Dołączone komórki dalej hodowano z modyfikowanym podstawowym podłożem Dulbecco (Invitrogen) zawierającym 10% płodową surowicę bydlęcą (Invitrogen) i stosowano jako fibroblasty serca po 2 pasażach. Niezwiązane komórki zostały ponownie umieszczone na 0,1% uprzednio powleczonych żelatynach naczyniach i dalej hodować 7% płodowej surowicy bydlęcej jako kardiomiocyty. Komórki były głodzone w surowicy przez 24 godziny przed eksperymentami. Biomechaniczny szczep komórek przeprowadzono w sposób opisany uprzednio (6,44). W przypadku analizy wielkości komórek in vitro, kardiomiocyty wysiewano przy 30%. 40% konfluencji, aby umożliwić określenie granic komórek. Hodowlę komórek mysich komórek NIH3T3 przeprowadzono stosując zmodyfikowane podstawowe podłoże Dulbecco (Invitrogen) zawierające 10% płodową surowicę cielęcą (Invitrogen). Ilościowa PCR. Ekspresję mRNA analizowano za pomocą ilościowego PCR stosując zestaw QuantiTect SYBR Green do odwrotnej transkrypcji-PCR (QIAGEN) i system Light Cycler (Roche Applied Science), jak opisano wcześniej (45). Całkowity RNA ekstrahowano z komórek za pomocą odczynnika TRI i analizowano 0,2 .g RNA. Sekwencje starterów do PCR były następujące: szczurzy IL-33, 5a -TCGCACCTGTGACTGAAATC-3. i 5 (3 -ACACAGCATGCCACAAACAT-3; szczurzy ANP, 5a-ATACAGTGCGGTGTCCAACA-3. i 5-CGAGAGCACCTCCATCTCTC-3; szczur BNP, 5a-GGAAATGGCTCAGAGACAGC-3. i 5. -CGATCCGGTCTATCTTCTGC-3 .. Analiza północna. Oczyszczone RNA z mózgów dorosłych szczurów zastosowano do syntezy cDNA z PCR z odwrotną transkryptazą. Zestaw starterów do syntezy sondy cDNA IL-33 o długości 471 par zasad, sonda cDNA pary 245 par zasad i sonda cDNA BNP z parą zasad 242 par zasad były następujące: IL-33, 5 (3 -AGTATCCAAGGAACTTCACTGCTA- 3. i 5a-TTACATCTTAGAGAGCTTAAACATGAT-3 .; sST2, 5. -TTACCCAGCCAGGATGTTTC-3. i 5. -CTAGGGGCTTGGCTTCTCTT-3 .; szczurzy ANP, 5a-ATACAGTGCGGTGTCCAACA-3. i 5-CGAGAGCACCTCCATCTCTC-3; mysz BNP, 5. -CAGCTCTTGAAGGACCAAGG-3. i 5. -AGACCCAGGCAGAGTCAGAA-3.
[więcej w: różyczka objawy u dorosłych, szpital dziecięcy lublin chodźki, zdrowa żywność zdrowy styl życia ]
[więcej w: twardzina układowa objawy, vegantalgin, lek doreta ]
[przypisy: twardzina układowa objawy, vegantalgin, lek doreta ]