Myszy nie posiadające cząsteczki sygnalizującej CalDAG-GEFI reprezentują model niedoboru adhezji leukocytów typu III ad

W związku z tym ocenialiśmy rolę CalDAG-GEFI w aktywacji integryn leukocytów, w szczególności członków rodziny integryn p2. Nasze wyniki wskazują na istotne wady integryny a1. i adranstynową integryną . neutrofili z niedoborem CalDAG-GEFI z in vitro i in vivo, co spowodowało wyraźnie osłabioną odpowiedź na ostre zapalenie. Ponadto zbadaliśmy funkcję CalDAG-GEFI w płytkach krwi i stwierdziliśmy, że CalDAG-GEFI jest niezbędny do aktywacji integryn | 3 na płytkach krwi i że tworzenie się skrzepu tętniczego zostało całkowicie zniesione w CalDAG-GEFI . /. myszy. Tak więc CalDAG-GEFI reguluje integryny a1, a2, i a3, co sugeruje, że ten gen może być wadliwy u pacjentów z LAD-III. Wyniki Normalna ekspresja receptorów agonistów, strumień wapnia i tworzenie ROS w neutrofilach z niedoborem CalDAG-GEFl. Aktywacja integryny odgrywa kluczową rolę w silnym przyleganiu i wynaczynieniu PBL (3). Wcześniej wykazano, że CalDAG-GEFI ulega ekspresji w płytkach krwi i granulocytach obojętnochłonnych oraz że ma krytyczne znaczenie dla aktywacji integryny. 3 w płytkach krwi (15). Aby określić, czy CalDAG-GEFI odgrywa rolę w aktywacji integryny w neutrofilach, badaliśmy reakcje neutrofili na aktywację in vitro i in vivo w CalDAG-GEFI P /. myszy i ich kontrola WT w miotach. Najpierw porównaliśmy ekspresję powierzchni kluczowych receptorów adhezji w neutrofilach z CalDAG-GEFI. /. i myszy WT. Jak pokazano w Tabeli 1, neutrofile CalDAG-GEF1 p i neutrofile WT wykazywały porównywalne poziomy ligandu glikoproteiny P-selektyny (1 (PSGL-1) i integryny a2 na ich powierzchni. Nie zaobserwowano różnicy w indukowanej przez agonistę regulacji w górę. Mp2 (Mac-1) na powierzchni komórki, co pokazuje, że neutrofile z nokautem są całkowicie zdolne do rekrutacji wewnątrzkomórkowych puli integryn poprzez uwalnianie granulek (Figura 1A). W porównaniu z neutrofilami WT, neutrofile z niedoborem CalDAG-GEFIp wykazywały ekspresję mniejszej selektyny L i integryny a1 na powierzchni komórek. Ryc. 1. Granulacja, przepływ wapnia i wytwarzanie ROS w stymulowanych neutrofilach. (A) Wyrażenie Mac-1. PBL z WT i CalDAG-GEFI. /. myszy utrzymywano w stanie spoczynku lub aktywowano przez 10 minut LTB4 (300 nM), C5a (50 ng / ml) lub PMA (200 nM), wybarwiono przeciwciałami przeciwko Mac-1 i natychmiast analizowano za pomocą cytometrii przepływowej. n = 6. (B) Strumień wapnia. PBL z WT i CalDAG-GEFI. /. myszy obciążono wrażliwym na wapń barwnikiem Fluo-3, aktywowano wskazanymi dawkami LTB4 lub C5a i natychmiast analizowano za pomocą cytometrii przepływowej. Wyniki są reprezentatywne dla 6 indywidualnych eksperymentów. (C) tworzenie ROS. PBL z WT i CalDAG-GEFI. /. myszy obciążono czynnikiem czułym na ROS DCFDA, aktywowano PMA (2. M) lub fMLP (5. M) przez 30 minut w 37 ° C i natychmiast analizowano za pomocą cytometrii przepływowej. n = 5. Wytwarzanie ROS wyrażono jako krotność wzrostu średniej intensywności fluorescencji względem niestymulowanych komórek. Nie zaobserwowano istotnych różnic w ekspresji Mac-1, strumieniu wapnia ani wytwarzaniu ROS między WT a neutrofilami z niedoborem CalDAG-GEFl. Tabela Ekspresja receptorów adhezyjnych na neutrofilach krwi obwodowej W celu zbadania odpowiedzi sygnalizacyjnych wyzwalanych przez agonistyczne receptory ulegające ekspresji na powierzchni, przetestowaliśmy kilku agonistów pod kątem ich zdolności do indukowania strumienia wapnia w neutrofilach z WT i CalDAG-GEFI. /. myszy. Nie zaobserwowano różnic w przepływie wapnia w odpowiedzi na różne dawki C5a lub leukotrienu B4 (LTB4, Figura 1B) lub formyl-metionylo-L-Licylofenyloalaniny (fMLP, dane nie pokazane) między WT i zmutowanymi komórkami, ani nie wykryliśmy istotnych różnic w tworzeniu ROS między WT a neutrofilami z niedoborem CalDAG-GEFI p stymulowanymi za pomocą fMLP lub PMA (Figura 1C). To odkrycie jest zgodne z wcześniejszymi badaniami pokazującymi, że mała GTPaza Rac (nie cel CalDAG-GEFI) jest wymagana do aktywacji oddechowej serii neutrofili (21, 22). Dane te ustalają, że ekspresja i funkcja receptorów agonistów i wewnątrzkomórkowych cząsteczek sygnalizacyjnych powyżej strumienia wapnia są prawidłowe w neutrofilach z niedoborem CalDAG-GEFl . i że funkcje komórkowe, takie jak degranulacja i tworzenie ROS są również nienaruszone. CalDAG-GEFI pośredniczy w aktywacji Rap1 w stymulowanych neutrofilach. Po ustaleniu, że zdarzenia wyzwalane przez agonistę powyżej strumienia wapnia były prawidłowe w neutrofilach z niedoborem CalDAG-GEFI3, badano następnie aktywację Rap1 w tych komórkach. W ciągu kilku sekund stymulacja leukocytów wyzwala aktywację Rap1, tj. Wymianę PKB na GTP związaną z małą GTPazą (23, 24). Wykryliśmy śladowe ilości aktywowanego Rap1 w lizatach spoczynkowego WT i neutrofilów z niedoborem CalDAG-GEFI .
[przypisy: szpital dziecięcy lublin chodźki, zdrowa żywność zdrowy styl życia, emedlink ]
[hasła pokrewne: ibum forte ulotka, szpital dziecięcy lublin chodźki, emedlink ]
[więcej w: ibum forte ulotka, szpital dziecięcy lublin chodźki, emedlink ]