Myszy nie posiadające cząsteczki sygnalizującej CalDAG-GEFI reprezentują model niedoboru adhezji leukocytów typu III czesc 4

Infuzja myszy WT blokującym przeciwciałem przeciwko integrynie a2 zmniejszała silną adhezję leukocytów o ponad 80%, potwierdzając ważną rolę integryn a2 w adhezji leukocytów uprzednio pokazaną w żyłkach CD18. /. (29) i Mac1. /. myszy (28). Nasze wyniki wskazują, że CalDAG-GEFI jest potrzebny do aktywacji integryn P2 zarówno in vitro, jak i in vivo. Figura 4. Utwierdzona silna adhezja leukocytów do żył krezkowych w CalDAG-GEFI. /. myszy. (A) Toczenie leukocytów in vivo. Liczba toczących się leukocytów w WT lub CalDAG-GEFI. /. myszy określano za pomocą mikroskopii śródocznej. Myszy infuzowano rodaminą 6G w celu oznaczenia krążących leukocytów. Trawienie leukocytów oceniano ilościowo 1. 5 minut po przetoczeniu za pomocą 300 nM LTB4. (B) Silna przyczepność. WT lub leukocyty z niedoborem CalDAG-GEFIp uznawano za mocno przylegające, gdy pozostawały one w bezruchu przez ponad 30 sekund. n = 6. (C) Blokowanie przeciwciał do integryny a2 znacznie zmniejsza adhezję leukocytów do żył krezkowych. Adhezję leukocytów w ciągu pierwszych 5 minut po superfuzji LTB4 badano u myszy WT, którym podawano infuzję PBS lub 40 .g przeciwciał anty-A (2A2 Ab. n = 3. * P <0,05, *** P <0,001. Nie zaobserwowano znaczącej różnicy w adhezji leukocytów pomiędzy nieleczonymi i kontrolnymi myszami WT traktowanymi IgG (nie pokazano). Upośledzona odpowiedź zapalna w CalDAG-GEFI. /. myszy. Aby przetestować zdolność CalDAG-GEFI. /. myszy reagowały na ostre zapalenie, prowokowaliśmy WT i zmutowane myszy przez dootrzewnowe wstrzyknięcie tioglikolanu (TG). Stosując ten model, kilka grup wykazało kluczową rolę dla integryn a2 w szybkiej rekrutacji neutrofilów do jamy otrzewnowej (30. 32). Inni nie stwierdzili wyraźnego zmniejszenia całkowitej liczby neutrofili rekrutowanych do otrzewnej z CD18. /. myszy (7). Jednak CD18. /. myszy charakteryzują się liczbą neutrofilów podwyższoną ponad 10-krotnie w porównaniu z grupą kontrolną, co sugeruje, że w tych badaniach obniżona została również wydajność rekrutacji neutrofili indukowanej przez TG. Znaleźliśmy kilka neutrofili w niezakwestionowanych jamach otrzewnowych WT i CalDAG-GEFI. /. myszy (Figura 5A). U myszy WT stwierdziliśmy silny wewnątrzotrzewnowy naciek neutrofili 4 godziny po prowokacji. Natomiast CalDAG-GEFI. /. myszy wykazywały około 80% zmniejszenie nacieku neutrofili w porównaniu z myszami WT po prowokacji (P <0,001, Figura 5A), demonstrując kluczową funkcję CalDAG-GEFI w rekrutacji neutrofili do zapalnej otrzewnej. Figura 5CalDAG-GEFI reguluje wynaczynienie neutrofilów. (A) zapalenie otrzewnej wywołane przez TG. Infiltrację leukocytów wyizolowano z otrzewnej WT i CalDAG-GEFI2 /. myszy 4 godziny po wstrzyknięciu PBS lub 3% TG. Liczbę neutrofilów określono przez analizę morfologiczną preparatów cytokuliny barwionej Diff-Quik przez obserwatora ślepego na genotyp. (B) Zapalenie skóry wywołane olejem krotonowym. Uszy WT i CalDAG-GEFI. /. myszy pomalowano olejem krotonowym, a infiltrujące neutrofile policzono 6 godzin później w sekcjach ucha wybarwionych H & E. Niewiele neutrofili znaleziono w uszach traktowanych podłożem. n = 3. 5. *** P <0,001. Aby przetestować CalDAG-GEFI. /. myszy w specyficznym modelu zależnej od integryny y2 (7) zbadaliśmy infiltrację neutrofili w uszach podrażnionych olejem krotonowym. Jak pokazano na Figurze 5B, liczba neutrofilów zliczono w uszykowanych farbą olejku krotonowego CalDAG-GEFI . /. myszy stanowiły około 60% kontroli WT (p <0,001). Te odkrycia wzmacniają przypadek CalDAG-GEFI jako krytycznej wewnątrzkomórkowej cząsteczki sygnałowej poprzedzającej aktywację integryny a2. Upośledzona aktywacja integryny y1 w płytkach z niedoborem CalDAG-GEFI. Aby określić, czy CalDAG-GEFI reguluje również funkcję integryny p1 w płytkach krwi, zbadaliśmy adhezję płytek do ustalonych substratów integryn p1. Płytki krwi wyrażają różnych członków podrodziny integryny y1, w tym P2B1 (kolagen jako główny ligand), A5a1 (fibronektyna jako główny ligand) i A6a1 (laminina jako główny ligand) (33). 34). Poziomy ekspresji integryn p1 były porównywalne w płytkach krwi z CalDAG-GEFI A / P. i myszy WT (średnia intensywność fluorescencji, 240,5. 8,0 i 242,7. 14,8, odpowiednio). Badaliśmy przyczepność aktywowanych płytek z niedoborem WT i CalDAG-GEFI . do powierzchni pokrytej lamininą przez stymulowanie płytek peptydem aktywującym PAR4 (PAR4p; GYPGKF) lub kombinacją ADP i mimetyku U60619 z tromboksanem A2. W celu uniknięcia adhezji / agregacji płytek, w których pośredniczy integryna | llabp3, doświadczenia przeprowadzono w obecności przeciwciała blokującego przeciwko temu receptorowi (35). [podobne: dieta przy dnie moczanowej tabela, malowanie włosów w ciąży, co dziś zjem na śniadanie ] [przypisy: lek doreta, dieta przy dnie moczanowej tabela, aspargin ulotka ] [hasła pokrewne: lek doreta, dieta przy dnie moczanowej tabela, aspargin ulotka ]