Niedotlenienie indukuje funkcjonalnie istotny i translacyjnie skuteczny wariant mRNA neuronalnej syntazy NO ad 5

Zróżnicowane ludzkie sekwencje 5 -UTR nNOS 5 wstawiono do miejsca wielokrotnego klonowania (MCS) pomiędzy ORF lucyferazy Renilla i Firefly. pRhrvF i pRpolioF zawierające odpowiednio element IRES ludzkiego rinowirusa i element IRES wirusa polio, służyły jako pozytywne kontrole aktywności IRES. (E) Stosunek Firefly do aktywności lucyferazy Renilla (FL / RL) w stosunku do aktywności konstruktu kontrolnego bez sekwencji nUT5 5 -UTR (pRF) w warunkach normalnych (białe słupki) i niedotlenionych (5 godzin; czarne słupki) . W badaniach oceniano aktywność reportera w hodowanych miocytach (komórki C2C12) przejściowo transfekowanych bicistronowymi konstruktami RNA. Dane są wyrażone jako średnia. SEM z 3 niezależnych eksperymentów, każdy przeprowadzony w trzech powtórzeniach. Wewnętrzna inicjacja tłumaczenia. Wybrana liczba mRNA ma zdolność do promowania wewnętrznej inicjacji translacji poprzez wewnętrzne miejsca wiązania rybosomu działające w cis (IRES) (30). Próbowaliśmy ustalić, czy IRES był aktywny w regulacji translacji mRNA nNOS w zasadzie lub podczas niedotlenienia. Skonstruowaliśmy serię bicistronowych wektorów opartych na plazmidzie pRF (Promega), który zawiera lucyferazę lucyferazy Renilla i lucyferazy Firefly (ORF) rozdzielone przez miejsce wielokrotnego klonowania. Konstrukty opracowano w celu rekapitulacji natywnych mRNA nNOS pochodzących z promotorów ekson 2 (pRFx2F), Ex-1c (pREx1cF) i Ex-1g (pRFEx1gF). Tłumaczenie lucyferazy Renilla zachodzi w sposób zależny od nasadki, podczas gdy translacja niezależna od kapelusza ORF lucyferazy Firefly występuje tylko wtedy, gdy IRES jest obecny w miejscu wielokrotnego klonowania. W związku z tym wzrost stosunku lucyferazy Firefly / Renilla (FL / RL) wskazywałby na obecność IRES. Nie stwierdzono wzrostu współczynników FL / RL dla żadnego z mNNA nNOS testowanego w warunkach normalnych lub niedotlenionych (Figura 8, D i E). Bicistronowy pRhrvF i pRpolioF zawierający element IRES ludzkiego rinowirusa i element IRES wirusa polio wstawiony w miejsce wielokrotnego klonowania pRF, transfekowano jako pozytywne kontrole aktywności IRES. Badania te wskazują, że wewnętrzna inicjacja za pośrednictwem IRES nie występuje w testowanych sekwencjach nNOS. Dyskusja Nadmierne utlenianie narządów zachowuje się podczas ostrego zmniejszenia dostarczania tlenu przez współczulne odruchy naczyniowe, które kierują przepływem krwi (12) i zwiększają ekstrakcję tlenu (11). W przeciwieństwie do tego, gdy niedotlenienie jest przedłużone (12. 48 godzin), upośledzona jest reaktywność tętnic systemowych (13, 14), a zatem i współczulnych odpowiedzi naczyniowych (15). Ogranicza to zdolność do utrzymywania utleniania narządu życiowego, jeśli podaż substratu musi zostać zwiększona, aby zaspokoić wzrost zapotrzebowania metabolicznego, który może wystąpić w przypadku nałożonego niedociśnienia lub jeśli niedotlenienie stanie się ostrzejsze. Wiadomo, że niedotlenienie indukuje zmiany w ogólnoustrojowym fenotypie naczyniowych komórek śródbłonka i zaburzenia w ekspresji NO pochodzącego z śródbłonka (31). Nasze obecne wyniki wskazują, że pomimo reminercji śródbłonka utrzymuje się spadek reaktywności naczyniowej po długotrwałej niedotlenieniu. Lokalizuje to ważny składnik nieprawidłowości w naczyniowym mięśniu gładkim. Stwierdziliśmy, że poziomy mRNA, białka i aktywności nNOS są wzmacniane przez niedotlenienie w układowych mięśniach gładkich naczyń. Co ważne, obecne prace potwierdzają i rozszerzają wcześniejsze badania, w których stwierdzono, że mRNA i białko nNOS przyczyniają się do powstawania NO pochodzących z VSMC, szczególnie w chorobie (1, 16, 18, 32. 34). Podkreśla to, że wszystkie 3 znane izoformy NOS u ssaków zostały zidentyfikowane w mięśniach gładkich naczyń (35, 36). Redystrybucja przepływu krwi w celu preferencyjnego zachowania niezbędnego utleniania narządowego jest centralnym komponentem reakcji na ogólnoświatową niedotlenienie, a to wymaga, aby układ naczyniowy był zdolny do reagowania na korektę napięcia adrenergicznego (11, 12). Jeśli ogranicza się do tętniczek, które regulują opór transnaczyniowy, zwiększenie zdolności do wytwarzania NO można interpretować jako część odpowiedzi adaptacyjnej, ponieważ spowodowałoby to najbardziej znaczące hamowanie tonu tętniczego w regionach, w których brak równowagi między dostarczaniem tlenu i zapotrzebowaniem metabolicznym jest największy. Utrata kurczliwości naczyniowej, chociaż adaptacyjna na poziomie regionalnym, może mieć znaczenie patofizjologiczne w chorobach sercowo-płucnych związanych z ogólnym upośledzeniem systemowego dostarczania tlenu. Wcześniejsze badania wskazują, że po długotrwałym zmniejszeniu całkowitego dostarczania tlenu, upośledzenie układowej funkcji naczyniowo-naczyniowej jest powszechne, obejmując zarówno oporność (13), jak i naczynia przewodzące (14, 37).
[więcej w: malowanie włosów w ciąży, co dziś zjem na śniadanie, street workout plan treningowy ]
[hasła pokrewne: lek doreta, dieta przy dnie moczanowej tabela, aspargin ulotka ]
[patrz też: lek doreta, dieta przy dnie moczanowej tabela, aspargin ulotka ]