Peptydowy inhibitor peptydu ARF FoxM1 w leczeniu raka wątrobowokomórkowego myszy ad 10

Co ciekawe, wykazaliśmy, że leczenie peptydem WT ARF26P indukowało znaczącą apoptozę w ludzkich komórkach wątrobowych HepG2, komórkach PLC / PRF / 5, które wyrażają zmutowane białko p53 i komórki Hep3B pozbawione p53. Pokazaliśmy także, że wyciszanie siRNA poziomów FoxM1 w komórkach HepG2 zmniejsza apoptozę w odpowiedzi na traktowanie peptydem WT ARF26P, co sugeruje, że zależna od ARF apoptoza tej linii komórek wątrobiaka wymagała ekspresji FoxM1. Ponadto wykazaliśmy, że komórki HepG2 zubożone w FoxM1 nie rozwijały się w hodowli i wykazywały niewykrywalne poziomy regulatorów mitotycznych PLK1, kinaza aurora B i białek surwiwiny (Figura 9). Przeciwnie, traktowanie komórek HepG2 peptydem WT ARF26 . spowodowało mniej drastyczne zmniejszenie ekspresji surwiwiny, PLK1 i białka kinazy Aurora B i umożliwiło wzrost komórek HepG2 w hodowli, ale spowodowało znaczącą indukcję apoptozy (Figura 9). ). Zgodnie z tymi ustaleniami, opublikowane badania wykazały, że hipomorficzne poziomy białka FoxM1 (40% poziomów WT FoxM1) w liniach komórkowych raka sutka transfekowanych innym dupleksem siRNA Foxm1 zmniejszały ekspresję regulatorów mitotycznych do poziomów, które są niewystarczające do prawidłowego wykonania mitozy, prowadząc do do katastrofy mitotycznej i apoptozy (63). Podsumowując, nasze wyniki sugerują, że leczenie peptydem WT ARF26a 44 komórek rakowych powoduje częściowe zahamowanie aktywności Foxm1, co prowadzi do katastrofy mitotycznej i apoptozy spowodowanej przez zmniejszenie ekspresji regulatorów mitotycznych PLK1, kinazę aurora B i białek surwiwiny do poziomów, które są niewystarczające do prawidłowego progresji mitotycznej. Angiogeneza komórek HCC jest krytycznym zdarzeniem, które służy do zwiększenia dopływu krwi do rosnącego guza, a białko CD34 jest wyrażane na nowych sinusoidopodobnych komórkach śródbłonka naczyń włosowatych HCC (39. 41). Myszy traktowane naszym peptydem WT ARF26 . nie opracowały nowych komórek śródbłonka CD34-dodatnich w kapilarach HCC (Figura 8C), podczas gdy angiogeneza HCC nie uległa zmianie w dsRNA CKO Mx-CreFoxm1. /. myszy. Jednym z wyjaśnień dla różnicy między tymi myszami jest to, że peptyd WT ARF26 . może także indukować apoptozę komórek śródbłonka CD34-dodatnich w kapilarach HCC, zapobiegając tym samym angiogenezie regionów HCC wymaganych do wzrostu i ekspansji guza (Figura 9K). Jest to poparte faktem, że traktowanie peptydem WT ARF26 . indukuje apoptozę komórek HMEC-1 in vitro (Figura 8E). Chociaż peptyd WT ARF26 . indukuje apoptozę komórek HepG2 in vitro, nie można wykluczyć możliwości, że ten peptyd WT ARF indukuje również apoptozę komórek HCC przez zapobieganie angiogenezie nowotworu, ograniczając w ten sposób dopływ krwi wymagany do wydajnego wzrostu HCC. Sekwencje peptydu WT ARF26 . wymagane do hamowania funkcji Foxm1 nie pokrywają się całkowicie z regionami kodującymi ARF niezbędnymi do inaktywacji innych regulatorów cyklu komórkowego. Na przykład, oba regiony aminokwasowe 1- [14 i 26 (37 białka ARF są wymagane do asocjacji i nukleonowego celowania białka regulatorowego ujemnego p53 Mdm2 (65) i białka NPM / B23 (49, 50). Zgodnie ze specyfiką traktowania peptydów przez WT ARF myszy, nie stwierdziliśmy zmian w ekspresji nowotworu wątroby białek Mdm2, p53 lub NPM / B23 in vivo, a apoptoza była niezależna od zwiększonej ekspresji PUMA, genu docelowego p53 wymaganego dla pośredniczące w apoptozie (52. 55). Białko supresorowe guza ARF także pośredniczy w kierowaniu jąder do jądra zarówno specyficznych dla proliferacji czynników transkrypcyjnych E2F1 i c-Myc (11. 14). Jednakże nie zachodzi nakładanie się z sekwencją peptydu WT ARF26 . lub sekwencjami ARF niezbędnymi do połączenia z białkiem E2F1 (sekwencje ARF, 6 ^ 10 i 21a25) (66) i c-Myc (sekwencje ARF 1. 14). białko (12). Testy kotransfekcji w komórkach U2OS wykazały, że konstrukty ekspresyjne zawierające sekwencje ARF 26 a 37 nie były w stanie skutecznie hamować aktywności transkrypcyjnej FoxM1b, co sugeruje, że hamowanie funkcji FoxM1 wymaga całej sekwencji peptydu ARF26 . (dane nie przedstawione). Ponadto, eksperymenty in vitro z komórkami HepG2 z niedoborem FoxM1 wykazały wyraźną zależność pomiędzy apoptozą peptydową FoxM1 i WT ARF26 .. Co więcej, ostatnie badania wykazały, że inicjacja translacji wytwarza produkt białkowy ARF rozpoczynający się przy reszcie 45 aminokwasowej metioniny i że to N-końcowe a skrócone białko ARF jest zlokalizowane w mitochondriach i indukuje śmierć komórek niezależną od kaspazy (67). Ponieważ te sekwencje peptydowe ARF26A44 nie są zawarte w tym N-końcowym skróconym polipeptydzie ARF, peptyd WT ARF26 . wykorzystuje mechanizm, który różni się od niezależnej od kaspazy funkcji tego N-końcowego skróconego peptydu ARF na N-końcu.
[patrz też: koszulki ratownik medyczny, malowanie włosów w ciąży, koszt ubezpieczenia zdrowotnego ]
[hasła pokrewne: emedlink, koszulki ratownik medyczny, twardzina układowa objawy ]
[patrz też: emedlink, koszulki ratownik medyczny, twardzina układowa objawy ]