Peptydowy inhibitor peptydu ARF FoxM1 w leczeniu raka wątrobowokomórkowego myszy ad 7

Te wyniki sugerują, że leczenie peptydem WT ARF26 . zapobiegało angiogenezie HCC, która prawdopodobnie była spowodowana przez apoptozę nowych komórek śródbłonka HCC. W celu określenia, czy peptyd WT ARF26 . indukuje apoptozę komórek śródbłonka, przez 48 godzin traktowano ludzkie komórki śródbłonka śródbłonka (komórki HMEC-1) 100 .M peptydu WT ARF264 lub zmutowanego peptydu ARF374 lub PBS. a następnie testowano pod kątem apoptozy, jak opisano w Metodach. Ta analiza ujawniła, że traktowanie peptydem WT ARF26P indukowało znaczący wzrost apoptozy komórek HMEC-1 w porównaniu z traktowaniem zmutowanym peptydem ARF374 lub PBS (Figura 8E). Te badania sugerują, że peptyd WT ARF26 . jest zdolny do indukowania apoptozy komórek śródbłonka, co przyczynia się do redukcji angiogenezy HCC zależnej od peptydu ARF. Figura 8 Peptyd ARF26a 44 zmniejsza angiogenezę i ekspresję surwiwiny w mysim HCC. Białko CD34 jest markerem dla nowo utworzonych sinusoidopodobnych kapilar w regionach HCC (39. 41), podczas gdy surwiwina ma kluczowe znaczenie w zapobieganiu apoptozie komórek nowotworowych (45. 48). Przeciwciała specyficzne wobec CD34 lub surwiwiny zastosowano do immunostymulowania wycinków nowotworowych HCC od myszy leczonych zmutowanym peptydem ARF374, peptydem WT ARF26P4 lub PBS lub z dsRNA CKO Mx-CreFoxm1 (3 / /. myszy. (A (D) Myszy traktowane peptydem WT ARF264 nie wykazują żadnych komórek śródbłonka CD34-dodatnich w kapilarach HCC, podczas gdy barwienie CD34 (wskazane strzałkami) było obfite w komórkach śródbłonka kontrolnych mysich HCC. (E) Peptyd WT ARF26a 44 indukuje apoptozę komórek HMEC-1. Komórki HMEC-1 traktowano przez 48 godzin 100 .M peptydu WT ARF264 lub zmutowanego peptydu ARF374 lub PBS, a następnie testowano na apoptozę, jak opisano w Metodach. Pokazano graficznie procent apoptozy komórek HMEC-1 w odpowiedzi na leczenie peptydem ARF. (Fjl) Zmniejszona ekspresja surwiwiny w traktowanym peptydem WT ARF26a (3 i Foxm1 (3 / /. guzy wątroby. Strzałki wskazują barwienie jądrowe dla białka surwiwiny. (J) Analiza Western blot ujawnia znaczny spadek ekspresji białka surwiwiny w guzach myszy traktowanych peptydem WT ARF26A4. (K) Nie stwierdzono zmniejszenia ekspresji białka NPM lub proapoptotycznego białka regulowanego p53 w nowotworach myszy traktowanych peptydem WT ARF26a45. Nieznaczny wzrost poziomów guza w wątrobie PUMA stwierdzono u myszy leczonych dsRNA. Powiększenie, × 400. Zredukowane poziomy antyapoptotycznego białka surwiwiny przyczyniają się do apoptozy HCC indukowanej peptydem WT ARF26a. Pokazaliśmy, że FoxM1 reguluje transkrypcję surwiwiny (26), która kompleksuje się z kinazą Aurora B, aby pośredniczyć w jej właściwej lokalizacji podczas mitozy (42. 44). Surwiwina jest również członkiem rodziny białek inhibitora apoptozy (IAP) i jest wybiórczo nadeksprymowana w komórkach nowotworowych, aby zapobiec ich apoptozie (45. 48). Zmutowany peptyd ARF37a44. lub guzy wątroby traktowane PBS wykazywały obfite barwienie jądrowe i cytoplazmatyczne białka surwiwiny (Figura 8, E i F), a ekspresja surwiwiny była ograniczona do mysiego regionu HCC (dane nie przedstawione). Poziomy surwiwiny jądrowej były zmniejszone w regionach HCC z traktowanych WT ARF26a peptydem p i dsRNA CKO Mx-CreFoxm1 (3 /. myszy (Figura 8, G i H). Analiza Western blot ujawniła, że Foxm1. /. guzy wątroby wykazywały 60% spadek ekspresji białka surwiwiny (fig. 8, I i J) i nie wykryto apoptozy w tych nowotworach wątroby z niedoborem FoxM1 (Figura 1, E. G). Bardziej drastyczne obniżenie poziomu białka surwiwiny o 90% stwierdzono w guzach wątroby u myszy traktowanych peptydem WT ARF26a (3 (Figura 8, Hj.J). Przedstawione poniżej dane dotyczące wątroby (ryc. 9) potwierdzają hipotezę, że leczenie peptydem WT ARF26 . powoduje hipomorficzne poziomy aktywności FoxM1, co zmniejsza ekspresję regulatorów mitotycznych do poziomów, które są niewystarczające do prawidłowego wykonania mitozy prowadzącej do apoptozy, podczas gdy zubożenie poziomu FoxM1 prowadzi do zatrzymania mitotycznego. Figura 9WT ARF26a 44 indukowana peptydem apoptoza ludzkich linii komórek wątrobiaka. Ludzki wątrobiak HepG2 (A. E), PLC / PRF / 5 (wyrażający zmutowane białko p53) lub komórki Hep3B (pozbawione p53) traktowano przez 24 godziny 25. M WT ARF26P4 lub zmutowany peptyd ARF37a44; następnie analizowano je pod kątem apoptozy za pomocą testu TUNEL i obliczano procent apoptozy (. SD) (E; *** P. 0,001). Scalone obrazy barwienia DAPI i TUNEL (A i C) pokazują jądra TUNEL-dodatnie komórek HepG2 (białe strzałki, B i D). (F) Graficzna reprezentacja komórek HepG2 traktowanych peptydem WT ARF26Ac, pokazujących, że apoptoza jest indukowana w komórkach zubożonych w p53, ale nie w komórkach z niedoborem FoxM1.
[podobne: szpital dziecięcy lublin chodźki, kalafior wartości odżywcze, zdrowa żywność zdrowy styl życia ]
[patrz też: przeziernosc karkowa, debutir ulotka, microgynon ulotka ]
[więcej w: przeziernosc karkowa, debutir ulotka, microgynon ulotka ]