Peptydowy inhibitor peptydu ARF FoxM1 w leczeniu raka wątrobowokomórkowego myszy ad

Ekspresja FoxM1 (lub FoxM1b) jest wszechobecna we wszystkich proliferujących komórkach ssaczych, a jego ekspresja jest indukowana podczas fazy G1 cyklu komórkowego i trwa w fazie S i mitozy (19. 23). Aktywność transkrypcyjna FoxM1b wymaga aktywacji szlaku RAS / MAPK i wiązania aktywowanych kompleksów CDK-cyklina do domeny aktywacyjnej, która pośredniczy w zależnej od fosforylacji rekrutacji koaktywatora transkrypcyjnego wiążącego białko CREB (CBP) (24). Badania regeneracji wątroby, w których wykorzystano transgen genowy promotor / wzmacniacz alfa, cre-recombinaza (Alb-Cre) do pośredniczenia w delecji specyficznej wobec hepatocytów mysiego allelu ukierunkowanego na Foxm1 LoxP / LoxP (Foxm1fl / fl) wykazały, że Foxm1 jest wymagany do replikacji i mitozy DNA hepatocytów ( 25). Hepatocyty z niedoborem Foxm1 gromadzą poziomy jądrowe białek inhibitora CDK (CDKI) p21Cip1 i p27Kip1 (8, 25), ponieważ FoxM1 reguluje ekspresję białka 2 związanego z kinazą S (Skp2) i podjednostki CDK (26). , które biorą udział w celowaniu białek CDKI w celu degradacji podczas przejścia G1 / S (27). W przypadku progresji G2 / M, FoxM1 reguluje transkrypcję cykliny B1 i aktywującej Cdk1 fosfatazy Cdc25B (25, 28), a FoxM1 jest niezbędny do transkrypcji mitotycznych genów regulatorowych polo-podobnej kinazy (PLK1), kinazy aurora B, surwiwiny białko centromeru A (CENPA) i CENPB (26, 29, 30). Wcześniej używaliśmy transgenu Alb-Cre do warunkowego usuwania mysiego allelu Foxm1fl / fl w hepatocytach przed indukcją nowotworu wątroby DEN / PB. Hepatocyty z niedoborem FoxM1 nie uległy proliferacji i były oporne na rozwój nowotworów wątroby (8, 31). Ta oporność na nowotwór wiązała się ze wzrostem poziomów jądrowych białka CDK1 p27Kip1 i niewykrywalnymi poziomami fosfatazy CKc25B aktywatora CDK1 (8,31). Czynnik transkrypcyjny FoxM1 został zidentyfikowany jako nowy cel hamujący mysiego supresora guza ARF, a badania funkcji strukturalnej wykazały, że reszty aminokwasowe 26. 46 mysiego białka ARF były wystarczające do zahamowania FoxM1 (8). Ponadto, leczenie komórek U2OS osteosarcoma za pomocą penetrującego komórkę peptydu ARF26 . zawierającego 9 N-końcowych reszt d-argininy (D-Arg) (WT ARF26y44) (32, 33) znacząco zmniejszyło funkcję FoxM1 w tej linii komórkowej raka (8). Ponadto, poprzednio opracowano myszy Tg, w których promotor Rosa26 wykorzystywano do kierowania powszechną ekspresją ludzkiego cDNA FoxM1b, a zwiększone poziomy FoxM1b stymulowały proliferację komórek płucnych w odpowiedzi na uszkodzenie płuc (34) i stymulowały rozwój i progresję nowotworów prostaty u ludzi. zarówno myszy TRAMP / Rosa26-FoxM1b, jak i LADY / Rosa26-FoxM1b podwójnego Tg (35). W tym badaniu użyliśmy transgenowej prote-iny rekombinowanej Cre (Mx-Cre) Mx (36) do warunkowego usunięcia allelu Foxm1fl / fl w prekursorowych nowotworach wątroby myszy indukowanych przez traktowanie DEN / PB i wykazano, że FoxM1 jest niezbędny do progresji nowotworu. komórek raka wątroby. Pokazujemy, że podawanie peptydu WT ARF26 . myszom po ekspozycji na DEN / PB jest skutecznym sposobem leczenia w celu zmniejszenia funkcji Foxm1 in vivo, powodując selektywną apoptozę HCC i zmniejszoną proliferację i angiogenezę w regionach HCC. Pokazujemy również, że myszy Arfc / A Rosa26-FoxM1b Tg, w których FoxM1b ulega nadmiernej ekspresji i hamowane jest hamowanie ARF aktywności transkrypcyjnej FoxM1, rozwinęło wysoce proliferacyjne guzy wątroby po ekspozycji na DEN / PB. Wykazaliśmy, że terapia peptydem WT ARF26a 44 tych myszy Arfc / A Rosa26-FoxM1b Tg skutecznie zmniejszała proliferację HCC i selektywnie indukowała apoptozę regionu HCC. Wyniki Mysi czynnik transkrypcyjny Foxm1 jest niezbędny do progresji guza w wątrobie. Wcześniej wykazaliśmy, że warunkowa delecja Foxm1 w hepatocytach przed indukcją nowotworu wątroby DEN / PB jest wystarczająca do zahamowania inicjacji guza wątroby (8, 31). Tutaj ustaliliśmy, że Foxm1 jest wymagany do progresji nowotworu wątroby. W tym celu użyliśmy transgenicznego transkryptu Mx-Cre IFN-y /. (36) do warunkowego wybicia (CKO) lub usunięcia allelu Foxm1fl / fl w istniejących wcześniej nowotworach wątroby wywołanych ekspozycją DEN / PB ( 8). Myszy indukowaliśmy HCC u myszy przez 30 tygodni ekspozycji na DEN / PB, a następnie indukowano ekspresję Mx-Cre syntetycznym dwuniciowym RNA (dsRNA) do CKO allela ukierunkowanego na Foxm1fl / fl. Myszy następnie poddano dodatkowym 10 tygodniom protokołu promocji nowotworu PB (Figura 1A). Aby uzyskać długoterminowe znakowanie BrdU nowotworów wątroby, myszom podawano wodę pitną zawierającą mg / ml BrdU przez 4 dni (8, 37). Transgen Mx-Cre skutecznie usuwał allel ukierunkowany na Foxm1fl / fl, o czym świadczy brak wykrywalnego barwienia jądrowego białka FoxM1 w wątrobowych guzach dsRNA CKO Mx-CreFoxm1. /. myszy w porównaniu z kontrolnymi guzami wątroby (Figura 1, Bd). Figura Mysi czynnik transkrypcyjny Foxm1 jest wymagany w wątrobowym postępie guza. (A) Schemat przedstawiający eksperymentalny projekt con
[podobne: zdrowa żywność zdrowy styl życia, objawy głodu alkoholowego, rehabilitacja po zerwaniu ścięgna achillesa ]
[przypisy: koszulki ratownik medyczny, twardzina układowa objawy, vegantalgin ]
[podobne: koszulki ratownik medyczny, twardzina układowa objawy, vegantalgin ]