Peptydowy inhibitor peptydu ARF FoxM1 w leczeniu raka wątrobowokomórkowego myszy czesc 4

Znakowanie fluorescencyjne TMR ujawniło, że peptyd WT ARF26 . był zlokalizowany w cytoplazmie hepatocytów i jąderku (biała strzałka) oraz w wątrobowych komórkach mezenchymalnych (żółta strzałka). (H i I) Zarówno zmutowany peptyd ARF37a44 jak i peptyd WT ARF26P są skierowane do cytoplazmy hepatocytów i jąderka (białe strzałki), co określono za pomocą laserowej mikroskopii konfokalnej. Immunobarwne sekcje nowotworu z przeciwciałem swoistym dla białka NPM (czarne strzałki) (J) lub białka FoxM1 (K . M). Peptyd WT ARF26 . skierowany jest przeciwko guzowi FoxM1 do jąderka (czarne strzałki), podczas gdy FoxM1 pozostaje jądrowy po traktowaniu zmutowanym peptydem ARF374 lub PBS (czerwone strzałki). Powiększenie: × 400 (B. F i J. M); X 200 (G); i × 600 (H i I). Krzywa odpowiedzi na dawkę określa, że tylko ip wstrzyknięcie 5 mg / kg masy ciała lub więcej TMR znakowanego fluorescencyjnie peptydu WT ARF26 . było wykrywalne w cytoplazmie i jąderku hepatocytów oraz w wątrobowych komórkach mezenchymalnych w 24 godziny po podaniu (Figura 2G; patrz Metody). Po 32 tygodniach indukcji nowotworu DEN / PB wątroby, poddano myszy Foxml / fl do codziennych wstrzyknięć ip 5 mg / kg masy ciała peptydu WF ARF264 lub zmutowanego peptydu ARF374 przez 4 tygodnie i WT ARF26 <44 peptyd przez 8 tygodni (Figura 2A). Po 4 tygodniach leczenia znakowanymi fluorescencyjnie TMR peptydami ARF, laserowa mikroskopia konfokalna zatopionych w parafinie fragmentów nowotworu wątroby myszy ujawniła, że fluorescencja peptydu ARF umiejscowiona jest w cytoplazmie hepatocytów i jąderku (Figura 2, H i I) i była równomiernie rozmieszczona w wątrobie miąższ (dane nie pokazane). Barwienie białka FoxM1 w odcinkach guza wątroby traktowanego peptydem WT ARF264c było częściowo zlokalizowane w jąderku w wątrobowych komórkach nowotworowych (Figura 2L, czarne strzałki), które było podobne do wzoru barwienia immunologicznego jądrowej proteiny nukleofosminy (NPM; czarne strzałki). Przeciwnie, zmutowany peptyd ARF37a44. lub komórki nowotworu wątroby traktowane PBS wykazywały jedynie wybarwianie jądrowe FoxM1 (porównaj Fig. 2K i Figura 2M, czerwone strzałki). Badania te wykazują, że peptyd WT ARF26 . zmniejsza aktywność in vivo FoxM1 poprzez częściowe celowanie endogennego białka FoxM1 w jądro wątrobowych komórek nowotworowych. Peptyd WT ARF26a 44 zmniejsza proliferację i wielkość guzów wątroby. Następnie określiliśmy liczbę wątrobowych komórek nowotworowych, które inkorporowały BrdU u myszy traktowanych peptydem WT ARF264, zmutowanym peptydem ARF374 lub PBS. Znaczące zmniejszenie inkorporacji BrdU stwierdzono w guzach wątroby, które były leczone peptydem WT ARF26 . przez 4 lub 8 tygodni w porównaniu z guzami wątroby myszy leczonymi zmutowanym peptydem ARF374 lub PBS (Figura 3, A (K). W porównaniu z leczeniem kontrolnym, leczenie peptydem WT ARF26 . przez 8 tygodni znacznie zmniejszyło wzrost nowotworu i zapobiegło rozwojowi HCC większych niż 2 mm2 (Tabela 1). Wyniki te wskazują, że leczenie peptydem WT ARF26 . jest skuteczną metodą zmniejszania proliferacji i wzrostu HCC. Figura 3 Traktowanie myszy peptydem WT ARF26P zmniejsza proliferację mysich nowotworów wątroby. Guzy wątrobowe indukowano u myszy Fox1 / fl z traktowaniem DEN / PB, a następnie traktowano je codziennymi wstrzyknięciami ip 5 mg / kg masy ciała peptydu WT ARF264 lub zmutowanego peptydu ARF374 lub PBS przez 4 lub 8 tygodni. jak opisano w legendzie z rysunku 2A. Myszom traktowanym peptydem ARFa podawano wodę pitną z mg / ml BrdU przez 4 dni przed uśmierceniem w celu uzyskania długotrwałego znakowania guzów wątroby (37). Strzałki wskazują barwienie jądrowe na inkorporację BrdU, a groty strzałek pokazują marginesy guza wątroby. (A | J) Inkorporację BrdU wykryto przez barwienie immunohistochemiczne sekcji nowotworu wątroby monoklonalnym przeciwciałem BrdU od myszy traktowanych wskazanymi peptydami ARF. (K) Wykres średniej liczby komórek BrdU-dodatnich na nowotwór wątroby w kwadratowym milimetrze (SD) po traktowaniu peptydem WT ARF264 lub zmutowanym peptydem ARF374 lub PBS. Obliczyliśmy średnią liczbę (. SD) jąder dodatnich hepatocytów BrdU na milimetrowy guz wątroby z 3 różnych myszy traktowanych peptydem ARF, jak opisano w Methods. Gwiazdki wskazują statystycznie istotne zmiany: ** P. 0,01 i *** P. 0,001. Powiększenie: × 200 (A. J). Wcześniej wykazaliśmy, że oporność na nowotwór w Foxm1. /. guzy wątroby były związane z utrzymującą się akumulacją jądra białka CDK1 p27Kip1 (8). Komórki HCC traktowane peptydem WT ARF26a 44 wykazywały zwiększone poziomy jądrowe białka p27Kip1, które były podobne do tych znalezionych dla dsRNA CKO Mx-CreFoxm1 (3 /. guzy wątroby (ryc. 4, B i E) [więcej w: dieta przy dnie moczanowej tabela, emedlink, typy osobowości wg junga ] [więcej w: clotrimazolum ulotka, octenisept ulotka, koszulki ratownictwo medyczne ] [przypisy: clotrimazolum ulotka, octenisept ulotka, koszulki ratownictwo medyczne ]