Proteolityczne przetwarzanie dynaminy przez cytoplazmatyczną katepsynę L jest mechanizmem białkowo-nerkowej choroby nerek ad

Występował również silny wzrost CatL w komórkach kapsułki Bowmana i proksymalne komórki kanalikowe, jak wykazano wcześniej w stanach białkowych ). Wreszcie, barwienie CatL było również podwyższone w cytoplazmie podocytów . Ilościowa rt-PCR mikrorozdrobnionego kłębuszka z ludzkich biopsji pacjentów z nabytymi chorobami białkowymi: choroba minimalnej zmiany (MCD; n = 7), błoniaste zapalenie kłębuszków nerkowych (MGN; n = 9), ogniskowa segmentowa stwardnienie kłębuszków nerkowych (FSGS; n = 7 ) i nefropatii cukrzycowej (DN, n = 10). ** P <0,01. CON, kontrola (n = 8). (B) Oznaczenie CatL prawidłowej nerki ludzkiej. (C) znakowanie CatL ludzkiej nerki z nefropatią cukrzycową, łagodnie zmniejszoną czynnością nerek i białkomoczem z zakresu nerczycowego. (D) Immunocytochemia glomeruli myszy przy użyciu monoklonalnego przeciwciała anty-CatL. Myszy WT otrzymały PBS (WT CON) lub LPS (WT LPS). LPS wstrzyknięto również do CatL2 /. myszy (CatL . /. LPS). Oryginalne powiększenie, × 400 (C i D). (E) Mikrografy elektronowe FP. (F) Poziom białka w moczu określono przy użyciu standardowego testu Bradforda. Mocz pobrano bezpośrednio przed (linia podstawowa) i 48 godzin po dodaniu LPS. Każdy pasek reprezentuje co najmniej 8 zwierząt. Następnie zbadaliśmy, czy podobna regulacja w górę CatL występuje w mysim modelu białkomoczu LPS (3). Immunocytochemia przy użyciu przeciwciał anty-CatL (8, 9) wykryła słabe barwienie CatL w normalnych kłębuszkach nerkowych (Figura 1D, po lewej). Glomerularne znakowanie CatL wzrosło w ciągu 24 godzin po pojedynczym wstrzyknięciu LPS (Figura 1D, w środku), ale nie u myszy z brakiem CatL (Figura 1D, po prawej) (10). Obróbka LPS powodowała wymywanie FP u myszy kontrolnych (Figura 1E, lewa i środkowa), ale nie w traktowanej LPS CatL2 /. myszy (ryc. 1E, z prawej). W końcu, poziom białka w moczu wzrósł z poziomu podstawowego około 0,25 mg / ml do 1,2. 0,15 mg / ml u myszy kontrolnych, ale pozostała niezmieniona w traktowanej LPS CatL2 /. myszy (0,25 – 0,11 mg / ml) (Figura 1F). Dane te dostarczają dowodów genetycznych, że CatL ma zasadnicze znaczenie dla białkomoczu. LPS indukuje ekspresję CatL w cytoplazmie. Aby zbadać, w jaki sposób CatL wyzwala białkomocz, zbadaliśmy jego subkomórkową aktywność przed i po leczeniu LPS w hodowanych podocytach. Miejsca wewnątrzkomórkowe aktywności CatL i CatB wizualizowano za pomocą fluorogennego substratu, CV- (FR) 2, który emituje światło po cięciu CatL lub CatB (3). W nietraktowanych podocytach aktywność proteaz była ograniczona do lizosomów (Figura 2A, lewa kolumna). LPS leczenie drastycznie zwiększyło aktywność proteazy, która teraz rozszerzyła się poza lizosomy do cytoplazmy (Figura 2A, środkowa kolumna). Ogromna większość aktywności cytoplazmatycznej katepsyny po podaniu LPS mogła być przypisana do CatL, ponieważ była wrażliwa na inhibitor CatL Z-FF-FMK, który nie hamuje CatB (Figura 2A, prawa kolumna, zauważ tylko tylko okołojądrowe czerwone zabarwienie). Zgodnie z aktywnością CatL w cytoplazmie, białko CatL kolokalizowało się z białkiem błonowym związanym z lizosomem LAMP-2 w lizosomach komórek kontrolnych (Figura 2B, lewa kolumna). Po traktowaniu LPS nastąpił gwałtowny wzrost ogólnego barwienia CatL, z których część była obecna w cytozolu, jak również w jądrze (Figura 2B, prawa kolumna). Ponadto, indukowane CatL wykryto w pęcherzykach LAMP-2-dodatnich rozciągających się w procesach podocytów w pobliżu błony komórkowej, które prawdopodobnie reprezentują pęcherzyki przeznaczone do wydzielania (Suplementowa Figura 1B i odnośnik 9). Relokalizacja CatL po leczeniu LPS była specyficzna, ponieważ inne proteazy lizosomalne, takie jak CatB (Figura 2C) i mannozydaza. (Dodatkowa Figura 1C) była kolokalizowana wyłącznie z LAMP-2 przed i po traktowaniu LPS. Wreszcie, obecność CatL w cytoplazmie nie była spowodowana wyciekiem lizosomu (Suplemental Fig. 1D). Ryc. 2 Wywołanie białka cytoplazmatycznego CatL i aktywności za pomocą LPS. (A) Hodowane podocyty barwiono przy użyciu przeciwciał anty-LAMP-2 i zestawu do wykrywania aktywności BIOMOL CV-CatL / B. Kontrolne komórki, komórki traktowane 50. G / ml LPS przez 24 godziny i komórki traktowane LPS i 1. M selektywnego inhibitora CatL Z-FF-FMK pokazano. (B) Etykietowanie hodowanych podocytów przy użyciu przeciwciała anty-CatL, nietraktowane lub po traktowaniu 50 .g / ml LPS przez 24 godziny. (C) Etykietowanie hodowanych podocytów przy użyciu przeciwciała anty-CatB, nietraktowanego lub po traktowaniu 50 .g / ml LPS przez 24 godziny. (D) Schemat mRNA CatL i otrzymanych białek. (E) Subkomórkowe frakcjonowanie podocytów w izotonicznej sacharozie przed i 24 godziny po traktowaniu LPS
[patrz też: zdrowa żywność zdrowy styl życia, tabliczka mnożenia na czas, przygotowanie do rozmowy kwalifikacyjnej ]
[hasła pokrewne: aspargin ulotka, clotrimazolum ulotka, octenisept ulotka ]
[więcej w: aspargin ulotka, clotrimazolum ulotka, octenisept ulotka ]