ROS generowane przez pyłek oksydazy NADPH dostarczają sygnału, który zwiększa indukowane antygenem alergiczne zapalenie dróg oddechowych ad 5

Immunohistochemiczne barwienie kriosekcji płuc pokazuje nagromadzenie eozynofilów w okolicach okołowrzodowych płuc. Całkowity obszar eozynofili w obszarze okołonowo-pachowym oceniono ilościowo za pomocą analizy morfometrycznej. Kwasica – barwienie Schiffa na mucynie w reprezentatywnych odcinkach płuc. Komórki nabłonkowe koloru purpurowego są pozytywne dla mucyny. Powiększenie, × 100. (D) Całkowity obszar komórek zawierających mucynę w obszarze okołonowo oskrzelowym oceniono ilościowo za pomocą analizy morfometrycznej. (E) Jednoczesne podawanie X + XO z Amb a zwiększa liczbę komórek śluzu w nabłonku dróg oddechowych. Powiększenie, × 100. Wyniki to środki. SEM. n = 3. 6 myszy na grupę. P <0,0001. Ponieważ nasze wyniki (ryc. 1G) wskazują, że wewnętrzne oksyny oksydazy pyłku NADPH wytwarzają O2 ., przewidywaliśmy, że podawanie surogatu O2. generator powinien odtwarzać zdolność RWEH i Amb a do wywoływania zapalenia alergicznego. Rzeczywiście, podawanie X + XO z RWEH odtwarzało alergiczne zapalenie dróg oddechowych (Figura 4, A i B oraz Figura 5, A i B) i wytwarzanie mucyny (Figura 5, C i D) do poziomów uzyskanych z RWE. Podobnie, jednoczesne podawanie X + XO z Amb A silnie zwiększało gromadzenie się komórek zapalnych w płynach BAL (Figura 4, A i B) i liczbę komórek zawierających mucynę w nabłonku dróg oddechowych (Figura 5E). Jednakże podawanie X + XO samo w sobie nie powodowało zapalenia (Figura 4, A i B, i Figura 5, A i B) i zwiększało liczbę komórek zawierających mucynę (Figura 5, C i D), co wskazuje, że Sam ROS nie zapewnia wystarczającego sygnału do wywoływania tych efektów. Aby potwierdzić znaczenie swoistych oksydaz NADPH pyłkowych w indukcji alergicznego zapalenia, ocenialiśmy efekty zapalenia płuc wywołane pRWEOX. i jednoczesne podawanie RWE z QA, rozpuszczalnym w wodzie inhibitorem oksydazy NADPH (21). Wyzwanie z pRWEOX. indukowały niższe poziomy IgE swoiste dla pRWEOXa w surowicy niż prowokację RWE (Figura 6A). Co więcej, wyzwanie z pRWEOX. zrekrutowano mniej eozynofili (Figura 6B) i całkowite komórki zapalne (Figura 6C) w płynach BAL, niż prowokowano RWE. Podobnie, jednoczesne podawanie RWE z QA hamowało rekrutację eozynofilów (Figura 6B) i całkowitych komórek zapalnych (Figura 6C). Łącznie odkrycia te sugerują, że sygnały generowane przez wewnętrzną oksydazę NADPH w RWE (sygnał 1) zwiększają alergiczne zapalenie płuc i liczbę komórek zawierających mucyn indukowanych przez antygen pyłkowy (sygnał 2). Aby potwierdzić tę hipotezę, zakwestionowaliśmy myszy uczulone RWE na kombinację pRWEOX + i pRWEOX. do generowania sygnałów i 2. W 2 dodatkowych grupach testowych, usunęliśmy sygnał z materiału prowokującego albo przez inaktywację termiczną pRWEOX + albo przez jednoczesne podawanie kwasu 4,5-dihydroksy-1,3-benzeno-disulfonowego (Tiron) w celu wychwycenia ponadtlenków ( 57). Kombinacja sygnałów i 2 indukowała 2,5 do 3 razy więcej eozynofilów w drogach oddechowych niż sygnał (fig. 6D). Figura 6 Odwrócenie lub neutralizacja wewnętrznego oksydazy NADPH z RWE zmniejsza poziomy IgE i nasilenie alergicznego zapalenia płuc. (A) specyficzne dla pRWEOXa poziomy IgE w surowicy. Myszy uczulano RWE dootrzewnowo i prowokowano donosowo PBS lub równe stężenia białka pRWEOX. lub RWE. Specyficzne dla pRWEOX . IgE oznaczono ilościowo za pomocą testu ELISA. (B i C) Myszy uwrażliwione na RWE prowokowano RWE lub RWE plus QA. Dodanie QA spowodowało zahamowanie eozynofili indukowanej przez RWE (B) i rekrutację całkowitej komórki zapalnej (C) w drogach oddechowych. (D) Wyzwanie z aktywną frakcją NADPH (pRWEOX + plus pRWEOX.), Ale nie nieaktywne frakcje oksydazy NADPH (dezaktywowane ciepłem pRWEOX + [pRWEOX + H] plus pRWEOX. Lub pRWEOX + plus pRWEOX. I Tiron) indukuje rekrutację eozynofilów w drogach oddechowych Zwierzęta uwrażliwione na działanie RWE. Wyniki to środki. SEM. n = 5. 7 myszy na grupę. * P <0,05; ** P <0,01; P <0,001. Połączenie sygnałów i 2 generuje silne alergiczne zapalenie płuc. Nasze odkrycia sugerują, że 2 sygnały mogą być wymagane do wywołania silnego alergicznego zapalenia. Postawiliśmy hipotezę, że stres oksydacyjny generowany przez oksydazy pyłkowe NADPH indukuje odpowiedź wrodzoną, sygnał 1, niezależnie od adaptacyjnej odpowiedzi immunologicznej, i że to zwiększa alergiczne zapalenie płuc indukowane przez antygen pyłkowy (sygnał 2). Ponieważ wiadomo, że stres oksydacyjny indukuje neutrofilowe zapalenie dróg oddechowych (58), początkowo porównaliśmy możliwości pRWEOX + i pRWEOX. do rekrutacji neutrofili do dróg oddechowych u naiwnych myszy. Wyzwanie myszy naiwnych wywołanych przez pRWEOX + spowodowało 7-krotnie wyższą rekrutację neutrofili w ciągu 24 godzin niż w przypadku prowokacji pRWEOX. (Rysunek 7A) [hasła pokrewne: kalafior wartości odżywcze, piramida zdrowego zywienia, szpital dziecięcy lublin chodźki ] [patrz też: twardzina układowa objawy, vegantalgin, lek doreta ] [patrz też: twardzina układowa objawy, vegantalgin, lek doreta ]