ROS generowane przez pyłek oksydazy NADPH dostarczają sygnału, który zwiększa indukowane antygenem alergiczne zapalenie dróg oddechowych czesc 4

Wyzwanie z pRWEOX +, ale nie z pRWEOX -, wywołało podobne zwiększenie GSSG i 4-HNE. W próbie RWE indukowano również wewnątrzkomórkowe ROS w nabłonku dróg oddechowych w ciągu 15 minut (Figura 3, C i D). Jednak prowokować ekstraktami, które nie mają aktywności oksydazy NADPH, takich jak RWEH i pRWEOX. (Figura 3C) i Amb a (dane nie pokazane), nie wywoływały ROS w nabłonku dróg oddechowych. Gdy X + XO współpodawano z RWEH, odtwarzał on poziomy ROS w nabłonku. Podawanie przeciwutleniaczy, kwasu askorbinowego i NAC (53, 54) blokowało wzrost poziomów ROS nabłonka płucnego (Figura 3C). Myszy uczulone nie rekrutowały komórek zapalnych do dróg oddechowych nawet w godzinę po prowokacji RWE (Figura 3E), co wskazuje, że stres oksydacyjny w płucach występuje przed rekrutacją komórek zapalnych do dróg oddechowych. Odkrycia te wskazują, że wewnętrzne oksydazy pyłkowe NADPH szybko zwiększają poziomy ROS w płucach przed rekrutacją komórek zapalnych. Rysunek 3RWE zwiększa stres oksydacyjny i jego markery w płucach. (A i B) Wpływ prowokacji RWE na markery stresu oksydacyjnego GSSG (A) i MDA plus 4-HNE (B) w płynach wyściełających drogi oddechowe. Pokazano PBS (białe słupki) i RWE (czarne słupki; n = 4. 6 na grupę). Wyniki to środki. SEM. ** P <0,01; P <0,001. (C i D) Zmiana poziomów ROS w nabłonku płuc myszy po prowokacji ex vivo, jak określono za pomocą fluorescencji DCF (C) lub redukcji NBT (D). Powiększenie, × 100. AA, kwas askorbinowy. (E) Test prowokacji RWE nie rekrutował komórek zapalnych w godzinę po prowokacji u uczulonych myszy. Pokazane są PBS (białe słupki) i RWE (czarne słupki). Ponieważ uważa się, że adaptacyjna odpowiedź immunologiczna ma krytyczne znaczenie dla wytwarzania ROS w drogach oddechowych (49), zbadano wpływ prowokacji RWE u myszy z niedoborem komórek tucznych (C57BL / 6J-KitWv) (55) iu myszy z niedoborem Limfocyty B, limfocyty T i immunoglobuliny (NOD SCID) (56). Wyzwanie z indukowanymi markerem stresu oksydacyjnego RWE GSSG, MDA i 4-HNE u myszy z nokautem do poziomów podobnych do tych u myszy WT (Figura 3, A i B). Podobnie, RWE indukowało poziomy markerów stresu oksydacyjnego u myszy, które były naiwne, podobne do tych u myszy uczulonych na RWE (dane nie pokazane). Dane te wskazują, że ROS generowane przez wewnętrzne oksydazy pyłkowe NADPH indukują stres oksydacyjny w nabłonku dróg oddechowych i w płynie otaczającym drogi oddechowe niezależnie od adaptacyjnej odpowiedzi immunologicznej. ROS wytwarzany przez pyłki oksydazy NADPH wzmaga alergiczne zapalenie dróg oddechowych. Badaliśmy udział ROS generowanych przez oksydazy pyłkowe NADPH w indukcji alergicznego zapalenia dróg oddechowych. Zgodnie z wynikami naszych poprzednich publikacji (9, 10, 12), prowokacja RWE wywołała rekrutację eozynofilów (Figura 4A) i całkowitych komórek zapalnych (Figura 4B) w drogach oddechowych. W porównaniu z prowokacją RWE, prowokacja dopłucna ekstraktami, które nie mają aktywności oksydazy NADPH (RWEH i Amb a 1) rekrutowała znacznie mniejszą liczbę eozynofilów i całkowitych komórek zapalnych w płynach BAL (Figura 4, A i B). Zmniejszona zdolność RWEH i Amb a do wywoływania stanu zapalnego może być spowodowana brakiem stymulacji wytwarzania cytokiny Th2 (np. IL-4, IL-5, IL-13). Jednakże możliwość ta została wykluczona jako poziomy cytokin Th2 indukowane przez RWEH i Amb a podobne lub większe niż w RWE w hodowanych splenocytach (Figura 4C). Aby ocenić ilości eozynofili i komórek zawierających mucynę, wykonaliśmy analizy morfometryczne tkanki płucnej. Podobnie do wyników w płynie BAL, prowokacja dopłucna za pomocą RWEH indukowała znacząco mniejszą akumulację eozynofilów w obszarze okołoskrzelowym (Figura 5, A i B) i komórek zawierających mucyn w nabłonku dróg oddechowych (Figura 5, C i D) w porównaniu z Wyzwanie RWE. Figura 4ROS indukowana przez oksydazę NADPH jest wymagana do alergicznego zapalenia płuc i wytwarzania mucyny. (A i B) Usunięcie aktywności oksydazy NADPH (RWEH i Amb a 1) hamuje alergiczne zapalenie dróg oddechowych i zastępcze O2. generator X + XO odtwarza zapalenia indukowane przez RWEH- i Amba1a do poziomu RWE. Wyniki to środki. SEM. n = 7. 9 myszy na grupę. (C) Poziomy cytokin Th2 w supernatantach splenocytów. Splenocyty z myszy uwrażliwionych na RWE hodowano za pomocą PBS (białe słupki), RWE (czarne słupki), RWEH (jasnoszare słupki) lub Amb a (ciemnoszare słupki; n = 4. 6 na grupę) przez 96 godzin, i supernatanty analizowano za pomocą testu ELISA. Wyniki to środki. SEM. ** P <0,01; P <0,001; P <0,0001. Figura 5 Odwrót aktywności oksydazy NADPH z RWE zmniejsza gromadzenie się eozynofili w lokalizacji okołopłucnej i komórek zawierających mucynę w nabłonku dróg oddechowych [patrz też: malowanie włosów w ciąży, typy osobowości wg junga, kalafior wartości odżywcze ] [patrz też: szpital dziecięcy lublin chodźki, emedlink, koszulki ratownik medyczny ] [podobne: szpital dziecięcy lublin chodźki, emedlink, koszulki ratownik medyczny ]