ROS generowane przez pyłek oksydazy NADPH dostarczają sygnału, który zwiększa indukowane antygenem alergiczne zapalenie dróg oddechowych cd

Do potwierdzenia tej obserwacji wykorzystaliśmy test cytochromowy c. W obecności NADPH, pRWEOX + zmniejszył poziom cytochromu c, a redukcja ta została zniesiona przez SOD (Figura 1G). Te wyniki wskazują, że oksydazy pyłku NADPH wytwarzają O2 .; proces ten jest wrażliwy na inhibitory oksydazy NADPH i obróbkę cieplną. Oksydazy NADPH pyłkowe indukują stres oksydacyjny w hodowanych komórkach nabłonka. W oparciu o nasze początkowe odkrycie obecności O2. Continue reading „ROS generowane przez pyłek oksydazy NADPH dostarczają sygnału, który zwiększa indukowane antygenem alergiczne zapalenie dróg oddechowych cd”

ROS generowane przez pyłek oksydazy NADPH dostarczają sygnału, który zwiększa indukowane antygenem alergiczne zapalenie dróg oddechowych ad 10

Myszy naiwne i uczulone na RWE (BALB / c, NOD SCID lub C57BL / 6) poddano prowokacji RWE (100 .g), a płyny BAL zebrano po 30 minutach. Płyny BAL sklarowano przez odwirowanie (956 g przez 10 minut w 4 ° C), a próbki przechowywano w temperaturze <80 ° C. Dodano butylowany hydroksytoluen (0,5 mM, Sigma-Aldrich), aby zapobiec dalszemu utlenianiu lipidów w niektórych porcjach. Poziomy GSSG mierzono spektrofotometrycznie przy 412 nm, stosując zestaw glutation / GSSG-412 (Bioxytech; OXIS). MDA i 4-HNE oznaczono ilościowo przy użyciu zestawu do oznaczeń LPO-586 (OXIS) i zmierzono absorbancję przy 580 nm. Continue reading „ROS generowane przez pyłek oksydazy NADPH dostarczają sygnału, który zwiększa indukowane antygenem alergiczne zapalenie dróg oddechowych ad 10”

Peptydowy inhibitor peptydu ARF FoxM1 w leczeniu raka wątrobowokomórkowego myszy ad 9

Określiliśmy również krzywą wzrostu komórek HepG2 w 1, 2 lub 3 dni po traktowaniu peptydem WT ARF264, zmutowanym peptydem ARF374 lub PBS. Chociaż komórki HepG2 traktowane peptydem WF ARF26A4 wykazywały 50% apoptozę (Figura 9E), były zdolne do podtrzymania liczby początkowo pokrytych komórek (2×105), co sugeruje, że komórki traktowane peptydem WT ARFp mogły postępować przez cykl komórkowy (Figura 9J). Wyniki te są zgodne z ostatnimi badaniami, w których hipomorficzne poziomy białka FoxM1 (40% poziomów WT FoxM1) w liniach komórkowych raka sutka transfekowanych innym dupleksem siRNA Foxm1 zmniejszały ekspresję regulatorów mitotycznych do poziomów, które są niewystarczające do prawidłowego wykonania mitozy, prowadząc do do katastrofy mitotycznej i apoptozy (63). Na podstawie tych wyników proponujemy hipotezę, że leczenie peptydem WT ARF26P4 powoduje hipomorficzne poziomy aktywności FoxM1, prowadząc do apoptozy, podczas gdy zubożanie poziomów FoxM1 powoduje zatrzymanie mitotyczne. Jednak nie wykluczyliśmy innych możliwości. Continue reading „Peptydowy inhibitor peptydu ARF FoxM1 w leczeniu raka wątrobowokomórkowego myszy ad 9”

Hamowanie autofagii zwiększa apoptozę indukowaną terapią w modelu chłoniaka indukowanym przez Myc ad 5

Przedstawiono reprezentatywne obrazy komórek po 48 godzinach. (B) Kwantyfikacja odsetka komórek z więcej niż 4 punktami GFP-LC3 na komórkę (punktowane) w porównaniu z tymi z mniej niż 4 punktami GFP-LC3 na komórkę (dyfuzyjnie) traktowanymi wzrastającymi dawkami CQ zi bez hTAM w 24 godziny. (C) CQ moduluje autofagię w sposób niezależny od p53. p53 + / + i p53. /. Continue reading „Hamowanie autofagii zwiększa apoptozę indukowaną terapią w modelu chłoniaka indukowanym przez Myc ad 5”

Myszy nie posiadające cząsteczki sygnalizującej CalDAG-GEFI reprezentują model niedoboru adhezji leukocytów typu III

Mutacje pojedynczego genu, integryny mogą wyjaśniać funkcjonalne defekty poszczególnych komórek układu krwiotwórczego. U ludzi, mutacje w integrynie a2 prowadzą do zespołu niedoboru adhezji leukocytów (LAD), a mutacje w integrynie a3 powodują zaburzenia krzepliwości krwi Glanzmanna. Jednak wiele wad w komórkach krwi z udziałem różnych. integryny (a1, a2 i a3) występują jednocześnie u pacjentów z ostatnio opisanym LAD typu III (LAD-III). Tutaj pokazujemy, że produkt pojedynczego genu, czynnika wymiany nukleotydów nukleotydowych regulowanego przez Ca2 + i diacyloglicerol (CalDAG-GEFI), kontrolował aktywację wszystkich 3 integryn w układzie hematopoetycznym. Continue reading „Myszy nie posiadające cząsteczki sygnalizującej CalDAG-GEFI reprezentują model niedoboru adhezji leukocytów typu III”

Myszy nie posiadające cząsteczki sygnalizującej CalDAG-GEFI reprezentują model niedoboru adhezji leukocytów typu III ad 9

Immunoreaktywność wykrywano za pomocą ulepszonej chemiluminescencji Western Lightning (PerkinElmer Life Sciences). W celu określenia poziomu całkowitego Rap1, x 106 WT lub neutrofili z niedoborem CalDAG-GEFI p poddano lizie przy użyciu redukującego buforu do próbek SDS i białka rozdzielono na 15% żelu SDS-PAGE. Rapl wykryto za pomocą króliczych przeciwciał poliklonalnych, jak opisano powyżej. Test adhezji neutrofilów Dziewięćdziesiąt sześć studzienkowych płytek (Costar) powleczono 2 mg / ml fibrynogenu lub 10 ug / ml fibronektyny (obie od Sigma-Aldrich) przez noc i zablokowano 1% BSA przez 2 godziny. Izolowane neutrofile szpiku kostnego (1 x 106 / ml) dodano w obecności lub nieobecności wskazanych agonistów i inkubowano przez 30 minut w 37 ° C. Continue reading „Myszy nie posiadające cząsteczki sygnalizującej CalDAG-GEFI reprezentują model niedoboru adhezji leukocytów typu III ad 9”

IL-33 i ST2 obejmują krytycznie indukowany biomechanicznie i kardioprotekcyjny układ sygnalizacyjny ad 6

TAC w przybliżeniu podwoił liczbę jąder TUNEL-dodatnich po 4 tygodniach zarówno w WT, jak i ST2. /. myszy. Leczenie IL-33 nie miało wpływu na wyniki testu TUNEL. (B) Analiza krzywej przeżycia Kaplana-Meiera wykazała, że przeżycie ST2. Continue reading „IL-33 i ST2 obejmują krytycznie indukowany biomechanicznie i kardioprotekcyjny układ sygnalizacyjny ad 6”

Niedotlenienie indukuje funkcjonalnie istotny i translacyjnie skuteczny wariant mRNA neuronalnej syntazy NO ad

Maksymalne PE – i indukowane przez KCl naprężenia w pierścieniach aortalnych szczurów narażonych na niedotlenienie były niższe niż w pierścieniach od szczurów normoksycznych. Wartość EC50 była niższa (tj. Zwiększono czułość) po ablacji śródbłonka w pierścieniach zarówno zwierząt normoksycznych, jak i niedotlenionych. Usunięcie śródbłonka zwiększyło maksymalne napięcie podczas indukowanego przez PE skurczu w pierścieniach od szczurów normoksycznych, podczas gdy, jak zauważono wcześniej (14, 27), napięcie było większe w nienaruszonych niż w śródbłonku pierścieniach od szczurów narażonych na niedotlenienie. Leczenie L-NAME zwiększyło maksymalne napięcie i zmniejszyło EC50 podczas skurczu wywołanego przez PE w pierścieniach nienaruszonych w śródbłonku zarówno od zwierząt normoksycznych, jak i niedotlenionych, ale nie miało wpływu na odpowiedź na PE ani KCl w pierścieniach denaturowanych śródbłonkiem szczurów normoksycznych. Continue reading „Niedotlenienie indukuje funkcjonalnie istotny i translacyjnie skuteczny wariant mRNA neuronalnej syntazy NO ad”

Niedotlenienie indukuje funkcjonalnie istotny i translacyjnie skuteczny wariant mRNA neuronalnej syntazy NO ad 10

Trzy zachodzące na siebie klony P1 odwzorowano metodą częściowego trawienia enzymatycznego przy użyciu EcoRI, MluI, SalI i Smal w systemie mapowania CHEF-DR III (Bio-Rad Laboratories). Southern bloty hybrydyzowano ze znakowanymi [a-32P] znakowanymi ATP . starterami T7 i Sp6 i starterami specyficznymi dla eksonu 2. DNA PI o dużej masie cząsteczkowej częściowo strawiono Sau3AI, subklonowano do miejsca BamHI pBluescript SK (.), I poddany analizie sekwencji DNA. Sekwencję genomowego DNA określono na obu niciach genomowego DNA za pomocą zautomatyzowanego sekwenatora DNA ABI PRISM 377 (Applied Biosystems). Continue reading „Niedotlenienie indukuje funkcjonalnie istotny i translacyjnie skuteczny wariant mRNA neuronalnej syntazy NO ad 10”

Proteolityczne przetwarzanie dynaminy przez cytoplazmatyczną katepsynę L jest mechanizmem białkowo-nerkowej choroby nerek ad 6

W przeciwieństwie do tego, promotor podocyny kierował ekspresję wyłącznie w nerkach i dyn1 zlokalizowane głównie w podocytacH. Obecność dyn1 w FP podocytów wykazano za pomocą EM (Supplemental Figure 3C). Co ważne, leczenie LPS doprowadziło do zmiany barwienia dostarczanego przez gen dyn1WT w kłębuszkach, podczas gdy barwienie dynL356Q i dynR725A pozostało niezmienione (figura 5D). Ponadto traktowanie LPS prowadziło do wytworzenia p40, ale tylko u myszy eksprymujących dynWT (Figura 5E, ścieżka 2), a nie u myszy eksprymujących dynL356Q i dynR725A (Figura 5E, ścieżki 4 i 6). Generacja p40 wymagała obecności CatL, ponieważ nie została wykryta w CatL. Continue reading „Proteolityczne przetwarzanie dynaminy przez cytoplazmatyczną katepsynę L jest mechanizmem białkowo-nerkowej choroby nerek ad 6”