ROS generowane przez pyłek oksydazy NADPH dostarczają sygnału, który zwiększa indukowane antygenem alergiczne zapalenie dróg oddechowych ad

Nasze dane wskazują, że stres oksydacyjny indukowany oksydazą NADPH odgrywa kluczową rolę w ułatwianiu alergicznego zapalenia dróg oddechowych wywołanego antygenem pyłkowym. Wyniki Wszystkie badane pyłki mają wewnętrzną aktywność oksydazy NADPH. Komórki z różnych gatunków roślin zawierają oksydazy, które generują ROS i regulują ważne funkcje fizjologiczne, takie jak kiełkowanie nasion i wzrost włosów korzeniowych (32, 33). Analogicznie stwierdziliśmy, że kiełkowanie pyłku prawdopodobnie będzie wymagać ROS generowanych przez te oksydazy podczas procesów zapylania. Zastosowaliśmy test nitroblue tetrazolium (NBT) w celu ustalenia, czy ekstrakt z ambrozji (Ambrosia artemisiifolia) generuje ROS. Continue reading „ROS generowane przez pyłek oksydazy NADPH dostarczają sygnału, który zwiększa indukowane antygenem alergiczne zapalenie dróg oddechowych ad”

ROS generowane przez pyłek oksydazy NADPH dostarczają sygnału, który zwiększa indukowane antygenem alergiczne zapalenie dróg oddechowych ad 9

Błony inkubowano w buforze blokującym zawierającym 5% BSA w buforze TBST (20 mM Tris-zasada, 137 mM NaCl, pH 7,6 i 0,05% Tween 20) przez godzinę, a następnie inkubowano w pierwszorzędowym Ab (królicze poliklonalne przeciwciało ludzki p67phox, nr katalogowy SC-15342, Santa Cruz Biotechnology Inc.) przez godzinę. Alternatywnie, w przypadku analizy p38 MAPK, zastosowano oczyszczony przez powinowactwo królicze poliklonalne Ab wobec ufosforylowanego p38 MAPK (New England Biolabs). Po przemyciu 5 razy w buforze TBST, bloty inkubowano przez 30 minut ze sprzężonym z HRP drugorzędowym Ab (osiołowe przeciwciało przeciw-królicze skoniugowane z HRP, nr katalogowy NA 934, Amersham Biosciences). Bloty opracowano z użyciem ulepszonego substratu chemiluminescencji (ECL; Amersham Biosciences) zgodnie z protokołem producenta. Badania immunofluorescencji. Continue reading „ROS generowane przez pyłek oksydazy NADPH dostarczają sygnału, który zwiększa indukowane antygenem alergiczne zapalenie dróg oddechowych ad 9”

Peptydowy inhibitor peptydu ARF FoxM1 w leczeniu raka wątrobowokomórkowego myszy ad 7

Te wyniki sugerują, że leczenie peptydem WT ARF26 . zapobiegało angiogenezie HCC, która prawdopodobnie była spowodowana przez apoptozę nowych komórek śródbłonka HCC. W celu określenia, czy peptyd WT ARF26 . indukuje apoptozę komórek śródbłonka, przez 48 godzin traktowano ludzkie komórki śródbłonka śródbłonka (komórki HMEC-1) 100 .M peptydu WT ARF264 lub zmutowanego peptydu ARF374 lub PBS. a następnie testowano pod kątem apoptozy, jak opisano w Metodach. Continue reading „Peptydowy inhibitor peptydu ARF FoxM1 w leczeniu raka wątrobowokomórkowego myszy ad 7”

Hamowanie autofagii zwiększa apoptozę indukowaną terapią w modelu chłoniaka indukowanym przez Myc czesc 4

Jako niezależny pomiar apoptozy komórek nowotworowych w leczonych nowotworach, przeprowadzono analizę Western blot pociętej kaspazy-3 na lizatach komórek nowotworowych z guzów traktowanych TAM / PBS i TAM / CQ. Zwiększoną rozszczepioną kaspazę-3 obserwowano w lizatach nowotworów uzyskanych w 8 godzin po rozpoczęciu TAM / PBS lub TAM / CQ. Rozszczepiona kaspaza-3 była nieobecna w lizatach komórek nowotworowych traktowanych TAM / PBS otrzymanych po 48 godzinach, ale obecnych w lizatach nowotworów traktowanych TAM / CQ otrzymanych po 48 godzinach (danych nie przedstawiono). Figura 3 Wpływ aktywacji p53 zi bez CQ na apoptozę. (A) indukowana CQ śmierć komórki po aktywacji p53. Continue reading „Hamowanie autofagii zwiększa apoptozę indukowaną terapią w modelu chłoniaka indukowanym przez Myc czesc 4”

Hamowanie autofagii zwiększa apoptozę indukowaną terapią w modelu chłoniaka indukowanym przez Myc ad 11

Fragment XhoI / EcoRI zawierający region kodujący genu fuzyjnego GFP-LC3 wprowadzono do miejsca wielokrotnego klonowania MIGR1 w celu wytworzenia plazmidu MIGR1 / GFP-LC3. W celu wytworzenia retrowirusa o wysokim mianie komórki 293T kotransfekowano wektorem retrowirusowym (5 (ig) plus DNA pomocniczy (2,5 ug), stosując Lipofectamine 2000 (Invitrogen). Zastosowano następujące wektory retrowirusowe: MIGR1 / GFP-LC3, pKD, pKD / HC, pKD / shATG5 h2 i pKD / shATG5 h7. Kondycjonowaną pożywkę zebrano i przesączono przez filtr 0,45- (3M. Supernatanty hodowli następnie użyto do transdukcji komórek Myc / p53ERTAM, MEF p53 + / + i p53 p / pFF. Continue reading „Hamowanie autofagii zwiększa apoptozę indukowaną terapią w modelu chłoniaka indukowanym przez Myc ad 11”

Myszy nie posiadające cząsteczki sygnalizującej CalDAG-GEFI reprezentują model niedoboru adhezji leukocytów typu III ad 8

W CalDAG-GEFI u myszy, wady przyczepności neutrofili były najbardziej widoczne w warunkach przepływu, ale obserwowano go również w warunkach statycznych. Nasze odkrycie, że CalDAG-GEFI ma kluczowe znaczenie dla aktywacji integryn | 3, | 2, i | 3 w płytkach myszy i neutrofilach sugeruje, że ten gen może być wadliwy u pacjentów z LAD-III. Z powodu defektów w tworzeniu się skrzepu i rekrutacji leukocytów do miejsc zapalenia, myszy z niedoborem CalDAG-GEFI stanowią zwierzęcy model tej choroby. Metody Myszy CalDAG-GEFI. /. Continue reading „Myszy nie posiadające cząsteczki sygnalizującej CalDAG-GEFI reprezentują model niedoboru adhezji leukocytów typu III ad 8”

IL-33 i ST2 obejmują krytycznie indukowany biomechanicznie i kardioprotekcyjny układ sygnalizacyjny ad 5

Ogólny pomiar masy serca znormalizowany do masy ciała był zgodny z analizami histomorfometrycznymi. P <0,05 w porównaniu z kontrolą nieoperowaną (B) lub WT (C) sterowaną pozorowaniem; P <0,05 wobec tego samego traktowania w WT; P <0,05 w porównaniu z pozorowaniem w tej samej grupie; P <0,05. Odrębną analizę echokardiograficzną (również ślepą na genotyp) przeprowadzono na tych zwierzętach. Dane te wykazały, że delecja ST2 powodowała zarówno zwiększony przerost, jak i upośledzoną funkcję skurczową po TAC (Figura 5A). Ponadto, leczenie IL-33 zmniejszyło przerost u myszy WT, ale nie w ST2. Continue reading „IL-33 i ST2 obejmują krytycznie indukowany biomechanicznie i kardioprotekcyjny układ sygnalizacyjny ad 5”

Niedotlenienie indukuje funkcjonalnie istotny i translacyjnie skuteczny wariant mRNA neuronalnej syntazy NO

Testowaliśmy hipotezę, że indukcja neuronalnej syntazy NO (nNOS) osłabia kurczliwość mięśni gładkich naczyń po niedotlenieniu. Białko nNOS było podwyższone w aorcie, tętnicach krezkowych, tętnicach płucnych, mózgu i przeponie od szczurów eksponowanych na 8% O2 przez 48 godzin oraz w ludzkich aortalnych SMC po niedotlenionej inkubacji (1% O2). Aktywność syntazy NO zależna od Ca2 + była zwiększona w segmentach aorty zdrowego śródbłonka od szczurów eksponowanych na hipoksję. Ester metylowy NG-nitro-L-argininy wzmocnił odpowiedzi skurczowe pierścieni aortalnych pozbawionych śródbłonka i tętniczek krezkowych z eksponowanych na hipoksję szczurów, ale nie będących normalnymi (P <0,05). Stwierdzono, że transkrypt mRNA indukowalny przez hipoksję, ekspresjonowany przez komórki ludzkie, zawiera nowy niekatranslowany region 5 (3, zgodny z aktywacją transkrypcji w regionie genomowym sąsiadującym z eksonem 2. Continue reading „Niedotlenienie indukuje funkcjonalnie istotny i translacyjnie skuteczny wariant mRNA neuronalnej syntazy NO”

Niedotlenienie indukuje funkcjonalnie istotny i translacyjnie skuteczny wariant mRNA neuronalnej syntazy NO ad 9

Białka ekstrahowano w buforze do ekstrakcji, jak opisano powyżej i oznaczano ilościowo metodą Bradforda. Białka z aorty piersiowej, tętniczki krezkowe, tętnice płucne, przepony i mózgi ze szczurów eksponowanych na normoksyczne i niedotlenienie i z HASMCS rozdzielano na żelu SDS-poliakryloamidowym o gęstości 4. 12%, przenoszono na nitrocelulozę lub PVDF i sondowano przy użyciu nNOS-u. swoiste monoklonalne lub poliklonalne przeciwciało (BD Biosciences). Białka aortalne od szczurów eksponowanych na normoksyczne i niedotlenione komórki również inkubowano z monoklonalnym przeciwciałem specyficznym dla iNOS (BD Biosciences. Continue reading „Niedotlenienie indukuje funkcjonalnie istotny i translacyjnie skuteczny wariant mRNA neuronalnej syntazy NO ad 9”

Proteolityczne przetwarzanie dynaminy przez cytoplazmatyczną katepsynę L jest mechanizmem białkowo-nerkowej choroby nerek ad 5

(B) W stanie podstawowym dynamin jest homotetramerem. Samoorganizacja w struktury wyższego rzędu, takie jak pierścienie lub spirale, może być promowana przez GTP . S i aktywuje hydrolizę GTP za pośrednictwem złożenia, która z kolei napędza demontaż. Średnia domena Dynamina znajduje się wewnątrz spirali. (C) Rekombinowany dyn1 (20 pmol) (CON) zmieszano z CatL (1 pmol) (górny panel), CatB (środkowy panel) lub Furin (dolny panel). Continue reading „Proteolityczne przetwarzanie dynaminy przez cytoplazmatyczną katepsynę L jest mechanizmem białkowo-nerkowej choroby nerek ad 5”