ROS generowane przez pyłek oksydazy NADPH dostarczają sygnału, który zwiększa indukowane antygenem alergiczne zapalenie dróg oddechowych czesc 4

Wyzwanie z pRWEOX +, ale nie z pRWEOX -, wywołało podobne zwiększenie GSSG i 4-HNE. W próbie RWE indukowano również wewnątrzkomórkowe ROS w nabłonku dróg oddechowych w ciągu 15 minut (Figura 3, C i D). Jednak prowokować ekstraktami, które nie mają aktywności oksydazy NADPH, takich jak RWEH i pRWEOX. (Figura 3C) i Amb a (dane nie pokazane), nie wywoływały ROS w nabłonku dróg oddechowych. Gdy X + XO współpodawano z RWEH, odtwarzał on poziomy ROS w nabłonku. Continue reading „ROS generowane przez pyłek oksydazy NADPH dostarczają sygnału, który zwiększa indukowane antygenem alergiczne zapalenie dróg oddechowych czesc 4”

Peptydowy inhibitor peptydu ARF FoxM1 w leczeniu raka wątrobowokomórkowego myszy

Czynnik transkrypcyjny m-widełki (Foxm1) jest niezbędny do zapoczątkowania indukowanych przez rak nowotworów wątroby; nie wiadomo jednak, czy FoxM1 stanowi cel terapeutyczny w leczeniu raka wątroby. W tym badaniu wykorzystano traktowanie dietylo-nitrozoaminą / fenobarbitalem w celu wywołania nowotworów wątrobowokomórkowych (HCC) u myszy WT lub myszy Arfc / A Rosa26-FoxM1b Tg, w których nadkłęboką skrzynkę widłową M1b (FoxM1b) nadekspresjonowano i blokowano alternatywną ramkę odczytu (ARF) aktywności transkrypcyjnej FoxM1 jest wyeliminowany. Aby farmakologicznie zmniejszyć aktywność FoxM1 w HCC, poddaliśmy te myszy z HCC codziennym iniekcjom hamującego peptyd inhibitora funkcji FoxF1 ARF26 .. Po 4 tygodniach tego leczenia, regiony HCC wykazywały zmniejszoną proliferację komórek nowotworowych i angiogenezę oraz znaczny wzrost apoptozy w regionie HCC, ale nie w sąsiadującej prawidłowej tkance wątrobowej. Terapia peptydem ARF indukuje również apoptozę kilku różnych ludzkich linii komórek wątrobiaka, które korelują ze zmniejszonymi poziomami białka mitotycznych genów regulatorowych kodujących polo-podobną kinazę 1, kinazę Aurora B i surwiwinę, z których wszystkie są celami transkrypcyjnymi FoxM1, które są wysoce wyrażane w komórkach rakowych i działają w celu zapobiegania apoptozie. Continue reading „Peptydowy inhibitor peptydu ARF FoxM1 w leczeniu raka wątrobowokomórkowego myszy”

Peptydowy inhibitor peptydu ARF FoxM1 w leczeniu raka wątrobowokomórkowego myszy ad 9

Określiliśmy również krzywą wzrostu komórek HepG2 w 1, 2 lub 3 dni po traktowaniu peptydem WT ARF264, zmutowanym peptydem ARF374 lub PBS. Chociaż komórki HepG2 traktowane peptydem WF ARF26A4 wykazywały 50% apoptozę (Figura 9E), były zdolne do podtrzymania liczby początkowo pokrytych komórek (2×105), co sugeruje, że komórki traktowane peptydem WT ARFp mogły postępować przez cykl komórkowy (Figura 9J). Wyniki te są zgodne z ostatnimi badaniami, w których hipomorficzne poziomy białka FoxM1 (40% poziomów WT FoxM1) w liniach komórkowych raka sutka transfekowanych innym dupleksem siRNA Foxm1 zmniejszały ekspresję regulatorów mitotycznych do poziomów, które są niewystarczające do prawidłowego wykonania mitozy, prowadząc do do katastrofy mitotycznej i apoptozy (63). Na podstawie tych wyników proponujemy hipotezę, że leczenie peptydem WT ARF26P4 powoduje hipomorficzne poziomy aktywności FoxM1, prowadząc do apoptozy, podczas gdy zubożanie poziomów FoxM1 powoduje zatrzymanie mitotyczne. Jednak nie wykluczyliśmy innych możliwości. Continue reading „Peptydowy inhibitor peptydu ARF FoxM1 w leczeniu raka wątrobowokomórkowego myszy ad 9”

Hamowanie autofagii zwiększa apoptozę indukowaną terapią w modelu chłoniaka indukowanym przez Myc ad 6

W leczeniu ludzkich chłoniaków, leki alkilujące, takie jak cyklofosfamid, służą jako terapia pierwszego rzutu (27-29). W celu określenia, czy hamowanie autofagii może zwiększyć skuteczność alkilującego leku w nowotworach opornych na apoptozę, myszom z chłoniakami Myc / p53ERTAM podawano cyklofosfamid sam lub w połączeniu z CQ. Myszy z Myc / p53ERTAM chłoniakami traktowano pojedynczą dawką 50 mg / kg cyklofosfamidu ip, a następnie traktowano PBS lub 60 mg / kg / dzień CQ ip Leczenie PBS lub CQ powtarzano codziennie przez 13 dni (Figura 7A). Cyklofosfamid z lub bez CQ doprowadził do całkowitej regresji guza u wszystkich leczonych myszy. Cotreatment CQ znacznie poprawił regresję guza i opóźnił nawrót guza. Continue reading „Hamowanie autofagii zwiększa apoptozę indukowaną terapią w modelu chłoniaka indukowanym przez Myc ad 6”

Myszy nie posiadające cząsteczki sygnalizującej CalDAG-GEFI reprezentują model niedoboru adhezji leukocytów typu III ad

W związku z tym ocenialiśmy rolę CalDAG-GEFI w aktywacji integryn leukocytów, w szczególności członków rodziny integryn p2. Nasze wyniki wskazują na istotne wady integryny a1. i adranstynową integryną . neutrofili z niedoborem CalDAG-GEFI z in vitro i in vivo, co spowodowało wyraźnie osłabioną odpowiedź na ostre zapalenie. Ponadto zbadaliśmy funkcję CalDAG-GEFI w płytkach krwi i stwierdziliśmy, że CalDAG-GEFI jest niezbędny do aktywacji integryn | 3 na płytkach krwi i że tworzenie się skrzepu tętniczego zostało całkowicie zniesione w CalDAG-GEFI . Continue reading „Myszy nie posiadające cząsteczki sygnalizującej CalDAG-GEFI reprezentują model niedoboru adhezji leukocytów typu III ad”

Myszy nie posiadające cząsteczki sygnalizującej CalDAG-GEFI reprezentują model niedoboru adhezji leukocytów typu III ad 9

Immunoreaktywność wykrywano za pomocą ulepszonej chemiluminescencji Western Lightning (PerkinElmer Life Sciences). W celu określenia poziomu całkowitego Rap1, x 106 WT lub neutrofili z niedoborem CalDAG-GEFI p poddano lizie przy użyciu redukującego buforu do próbek SDS i białka rozdzielono na 15% żelu SDS-PAGE. Rapl wykryto za pomocą króliczych przeciwciał poliklonalnych, jak opisano powyżej. Test adhezji neutrofilów Dziewięćdziesiąt sześć studzienkowych płytek (Costar) powleczono 2 mg / ml fibrynogenu lub 10 ug / ml fibronektyny (obie od Sigma-Aldrich) przez noc i zablokowano 1% BSA przez 2 godziny. Izolowane neutrofile szpiku kostnego (1 x 106 / ml) dodano w obecności lub nieobecności wskazanych agonistów i inkubowano przez 30 minut w 37 ° C. Continue reading „Myszy nie posiadające cząsteczki sygnalizującej CalDAG-GEFI reprezentują model niedoboru adhezji leukocytów typu III ad 9”

IL-33 i ST2 obejmują krytycznie indukowany biomechanicznie i kardioprotekcyjny układ sygnalizacyjny ad 7

Ponieważ NF-kB odgrywa zasadniczą rolę w przeroście kardiomiocytów in vitro i in vivo, badaliśmy aktywację NF-kB zarówno w warunkach podstawowych, jak i stymulowanych. IL-33 lekko aktywowana NF-kB w warunkach podstawowych, ale IL-33 znacząco atenuowała angiotensynę II. i indukowaną przez fenylefrynę NF-kB w kardiomiocytach. Regulacja aktywacji NF-kB może wyjaśniać działanie przeciwhipertroficzne IL-33. Mechanizmy, dzięki którym IL-33 może tłumić aktywację NF-kB, są niejasne. Continue reading „IL-33 i ST2 obejmują krytycznie indukowany biomechanicznie i kardioprotekcyjny układ sygnalizacyjny ad 7”

Niedotlenienie indukuje funkcjonalnie istotny i translacyjnie skuteczny wariant mRNA neuronalnej syntazy NO cd

Analiza Western blot wykazała podwyższone poziomy białka nNOS w aortach, tętniczki krezkowe, tętnice płucne, przepony i mózgi od szczurów narażonych na niedotlenienie, w porównaniu z normoksycznymi Zwierząt. Poziomy białka nNOS były również zwiększone w ludzkich aortalnych SMC (HASMC) (Figura 4F) po inkubacji hipoksycznej. Białko iNOS nie zostało wykryte w homogenatach aortalnych szczurów narażonych na normoksyczność lub niedotlenienie (dane nie przedstawione). Figura 4nNOS Western blot przeprowadzane na białkach z aorty (A, n = 5 na grupę), tętniczek krezkowych (B, n = 6 na grupę), tętnic płucnych (C; n = 6 na grupę), przepony (D; n = 6 na grupę) i mózgów (E; n = 5 na grupę) od szczurów normoksycznych (białe słupki, N) i od szczurów narażonych na niedotlenienie 16 (szare słupki, 16H) i 48 (czarne słupki, 48H) godzin oraz od HASMC inkubowano w warunkach normalnych i niedotlenionych przez 48 godzin (F; n = 4 na stan). * P <0,05 dla różnicy od normoksycznej wartości kontrolnej. Continue reading „Niedotlenienie indukuje funkcjonalnie istotny i translacyjnie skuteczny wariant mRNA neuronalnej syntazy NO cd”

Niedotlenienie indukuje funkcjonalnie istotny i translacyjnie skuteczny wariant mRNA neuronalnej syntazy NO ad 10

Trzy zachodzące na siebie klony P1 odwzorowano metodą częściowego trawienia enzymatycznego przy użyciu EcoRI, MluI, SalI i Smal w systemie mapowania CHEF-DR III (Bio-Rad Laboratories). Southern bloty hybrydyzowano ze znakowanymi [a-32P] znakowanymi ATP . starterami T7 i Sp6 i starterami specyficznymi dla eksonu 2. DNA PI o dużej masie cząsteczkowej częściowo strawiono Sau3AI, subklonowano do miejsca BamHI pBluescript SK (.), I poddany analizie sekwencji DNA. Sekwencję genomowego DNA określono na obu niciach genomowego DNA za pomocą zautomatyzowanego sekwenatora DNA ABI PRISM 377 (Applied Biosystems). Continue reading „Niedotlenienie indukuje funkcjonalnie istotny i translacyjnie skuteczny wariant mRNA neuronalnej syntazy NO ad 10”

Proteolityczne przetwarzanie dynaminy przez cytoplazmatyczną katepsynę L jest mechanizmem białkowo-nerkowej choroby nerek ad 7

Podocyty zakażono przy użyciu adenowirusowego układu ekspresyjnego, który pozwala na ponad 90% skuteczność infekcji. Eksperymenty przeprowadzono przy użyciu izoformy neuronalnej dyn1 (Figura 6B), jak również dynamicznie eksprymowanej dyn2 (Suplementowa Figura 5). Te dwie izoformy dały identyczne wyniki, co pokazuje, że obserwowane fenotypy w podocytach nie były specyficzne dla izoform (porównaj barwienie F-aktyną w komórkach eksprymujących dynWT i dynK44A na Figurze 6B i Suplementowej Figurze 5). Aktinowa podocyta jest zorganizowana w równoległe wiązki włókien stresowych i korowego pierścienia nitkowatej aktyny (Figura 6B, CON). Ekspresja dynWT nie zmieniła znacząco wzoru barwienia F-aktyny (Figura 6B, WT). Continue reading „Proteolityczne przetwarzanie dynaminy przez cytoplazmatyczną katepsynę L jest mechanizmem białkowo-nerkowej choroby nerek ad 7”