Białko zapalne makrofagów 1 jako sygnał kostymulacyjny dla reakcji natychmiastowej nadwrażliwości z udziałem komórek tucznych ad 9

ELISA w surowicy IgE, IgG1 lub IgG2a przeprowadzono stosując zestaw myszy Mys Opt EIA lub skoniugowane z biotyną przeciwciała przeciw-mysie IgG1 lub IgG2a (BD Biosciences. Pharmingen). Test ELISA specyficzny dla antygenu przeprowadzono przy użyciu płytek pokrytych Fel d1 zamiast przeciwciał wychwytujących. Immunohistochemia. Serie zamrożonych skrawków (o grubości 10 urn) utrwalono acetonem w temperaturze 20 ° C przez 10 minut i wybarwiono na CCR1 stosując poliklonalne przeciwciało anty-CCR1 (Santa Cruz Biotechnology Inc.) i zestaw VECTASTAIN ABC (Vector Laboratories Inc.). Continue reading „Białko zapalne makrofagów 1 jako sygnał kostymulacyjny dla reakcji natychmiastowej nadwrażliwości z udziałem komórek tucznych ad 9”

ROS generowane przez pyłek oksydazy NADPH dostarczają sygnału, który zwiększa indukowane antygenem alergiczne zapalenie dróg oddechowych ad 7

W tym modelu, ROS generowane przez pyłki oksydazy NADPH indukują stres oksydacyjny (sygnał 1) niezależnie od adaptacyjnej odpowiedzi immunologicznej. Produkty wytwarzane przez stres oksydacyjny, taki jak GSSG i 4-HNE, ułatwiają alergiczne zapalenie dróg oddechowych indukowane przez antygen pyłkowy (sygnał 2). Wpływ sygnału obserwuje się po 24 godzinach po prowokacji, ponieważ rekrutacja neutrofili jest niezależna od odporności adaptacyjnej, ale jego działanie zanika po 72 godzinach po prowokacji, chyba że adaptacyjna odpowiedź immunologiczna ułatwi proces. Ten model wyjaśnia, dlaczego białka pyłkowe, które nie zawierają oksydaz NADPH iw konsekwencji nie mogą dostarczyć sygnału (Amb a 1, RWEH i pRWEOX.) Nie są w stanie wywołać silnego alergicznego zapalenia płuc. Nasze dane pokazują, że sygnał nie musi być specjalnie indukowany przez oksydazy NADPH, ponieważ można go zastąpić zastępczym systemem generowania ROS (tj. Continue reading „ROS generowane przez pyłek oksydazy NADPH dostarczają sygnału, który zwiększa indukowane antygenem alergiczne zapalenie dróg oddechowych ad 7”

Peptydowy inhibitor peptydu ARF FoxM1 w leczeniu raka wątrobowokomórkowego myszy ad 5

Przeciwnie, immunobarwienie p27Kip1 było przeważnie cytoplazmatyczne w zmutowanym peptydzie ARF37a44. Badania te wskazują, że peptyd WT ARF26 . jest skuteczny w zmniejszaniu funkcji FoxM1 in vivo i że akumulacja jądra białka p27Kip1 była związana ze zmniejszoną proliferacją nowotworu wątroby. Figura 4 przedstawia terapię peptydem ARF26P44 powodującą akumulację jądrową białka p27Kip1 w mysich nowotworach HCC. (A (3F) Nuklearna akumulacja białka p27Kip1 w nowotworach HCC z myszy traktowanych peptydem WT ARF26a44a i dsRNA Mx-CreFoxm1a /. Continue reading „Peptydowy inhibitor peptydu ARF FoxM1 w leczeniu raka wątrobowokomórkowego myszy ad 5”

Hamowanie autofagii zwiększa apoptozę indukowaną terapią w modelu chłoniaka indukowanym przez Myc ad

Po okresie opóźnienia nowotworu 100% zwierząt doświadczyło nawrotu guza pomimo ciągłego leczenia TAM. W niniejszym badaniu CQ znacznie poprawiło regresję guza i opóźniło nawrót guza po aktywacji p53 lub podaniu chemioterapii cytotoksycznej. Autofagia była aktywowana w komórkach nowotworowych, które przeżyły apoptozę po stresie terapeutycznym. Leczenie CQ przy niskich dawkach mikromolowych hamowało zależne od autofagii przeżycie komórek nowotworowych, a jego efekty były podobne do efektów genetycznego knockdown podstawowego genu autofagii ATG5 w zwiększaniu indukowanej przez p53 śmierci komórek apoptotycznych. Łączenie CQ w tych dawkach z krótkim RNA o strukturze spinki do włosów (shRNA) przeciwko ATG5 nie zwiększało jeszcze poziomu śmierci komórek po aktywacji p53. Continue reading „Hamowanie autofagii zwiększa apoptozę indukowaną terapią w modelu chłoniaka indukowanym przez Myc ad”

Hamowanie autofagii zwiększa apoptozę indukowaną terapią w modelu chłoniaka indukowanym przez Myc ad 9

Chemiczna struktura pochodnych CQ pozwala im służyć jako słabe zasady, które zostają uwięzione w kwaśnych przedziałach. Ponieważ guzy glikolityczne są charakterystycznie bardziej kwasowe niż otaczająca normalna tkanka (52), pochodne CQ mogą preferencyjnie gromadzić się w tkance nowotworowej i wykazywać większą skuteczność w hamowaniu autofagii w guzie w porównaniu do normalnej tkanki. Ogólnoustrojowe podawanie CQ w dawkach mniej więcej równoważnych dawkom stosowanym w leczeniu malarii lub reumatoidalnego zapalenia stawów było dobrze tolerowane przez myszy do 20 dni. Chociaż doniesiono, że CQ ma wiele dodatkowych efektów komórkowych oprócz zdolności do hamowania autofagii, zdolność niskich dawek CQ do wzmacniania apoptozy indukowanej p53 była zależna od jej wpływu na autofagię. Podczas gdy shRNA ATG5 niezależnie zwiększał indukowaną przez p53 śmierć komórek, nie obserwowano dalszego zwiększenia śmierci komórki, gdy komórki nowotworowe wyrażające shRNA ATG5 były traktowane niskimi dawkami CQ. Continue reading „Hamowanie autofagii zwiększa apoptozę indukowaną terapią w modelu chłoniaka indukowanym przez Myc ad 9”

Myszy nie posiadające cząsteczki sygnalizującej CalDAG-GEFI reprezentują model niedoboru adhezji leukocytów typu III ad 6

W 40-minutowym okresie obserwacji nie pojawiły się skrzepliny u zmutowanych myszy. P <0,001. Dyskusja Stwierdziliśmy, że CalDAG-GEFI był głównym regulatorem aktywacji integryli a1, P2 i a3 na płytkach krwi i neutrofilach, zarówno in vitro, jak i in vivo. W konsekwencji, myszy pozbawione CalDAG-GEFI miały wadliwe odpowiedzi zapalne i znacznie osłabioną zdolność do tworzenia skrzeplin w odpowiedzi na uszkodzenie naczyń. Ten fenotyp jest uderzająco podobny do tego opisanego dla pacjentów z LAD-III, który łączy łagodny LAD z zaburzeniem krwawienia podobnym do Glanzmanna (9. Continue reading „Myszy nie posiadające cząsteczki sygnalizującej CalDAG-GEFI reprezentują model niedoboru adhezji leukocytów typu III ad 6”

IL-33 i ST2 obejmują krytycznie indukowany biomechanicznie i kardioprotekcyjny układ sygnalizacyjny cd

Wyniki były podobne do wyników analizy poboru leucyny. Dane te silnie sugerują, że IL-33 jest mechanicznie indukowanym ligandem dla ST2L i że sST2 blokuje sygnalizację IL-33 / ST2L. Figura 2IL-33 blokuje bodźce prohypertroficzne w kardiomiocytach, a sST2 hamuje IL-33. (A) IL-33 wykazała nieistotną tendencję do stymulowania hipertrofii, ale IL-33 blokowała angiotensynę II. i indukowany fenylefryną (Phe) leucyny w sposób zależny od dawki. Continue reading „IL-33 i ST2 obejmują krytycznie indukowany biomechanicznie i kardioprotekcyjny układ sygnalizacyjny cd”

IL-33 i ST2 obejmują krytycznie indukowany biomechanicznie i kardioprotekcyjny układ sygnalizacyjny ad 10

Naczynia delikatnie zeskrobano, a jądra zebrano przez odwirowanie przy 800 g przez 30 sekund, a następnie zawieszono w roztworze 50 mM HEPES, 400 mM KCl, 0,1 mM EDTA, 10% glicerolu, mM DTT, 0,5 mM PMSF i 10 y / ml leupeptyny. Mieszaninę inkubowano na lodzie przez 30 minut, a supernatant zebrano po odwirowaniu przez 15 minut przy 400 g. Reakcje wiązania przeprowadzono za pomocą 5 lub 10 .g białka jądrowego w 10 mM Tris, mM DTT, mM EDTA, 5% glicerolu, 0,1% Triton X-100, mg poli (d1dC), 5 .g BSA, i 10 000 cpm znakowanego [32P] oligonukleotydu. Konkretnymi oligonukleotydami konsensusowymi NF-kB były 5 (3 -AGTTGAGGGGACTTTCCCAGGC-3. i 5. Continue reading „IL-33 i ST2 obejmują krytycznie indukowany biomechanicznie i kardioprotekcyjny układ sygnalizacyjny ad 10”

Niedotlenienie indukuje funkcjonalnie istotny i translacyjnie skuteczny wariant mRNA neuronalnej syntazy NO ad 7

U gryzoni Sasaki i in. znaleźli dowody na aktywację transkrypcji dopływającej Ca2 + w neuronach. Charakterystyka gatunków mRNA i funkcjonalna ocena aktywności promotorowej in vitro ujawniły 2 krytyczne elementy odpowiedzi cAMP / Ca2 + (CREs) w ortologicznych regionach genomowych, które odpowiadają opisanym tutaj ludzkim sekwencjom. Aktywacja scharakteryzowanych tutaj regionów genomowych (numer dostępu w GenBank U17299), zarówno in vitro, jak i in vivo, powoduje ekspresję transkryptów mRNA z krótkimi 5 p -UTR reprezentującymi sekwencje bezpośrednio przed ORF o pełnej długości. Nie zawiera TATA i znajduje się w regionie genomowego DNA zubożonego w CpG (kompozycja nt ~ 2,453 do około 77 w stosunku do kodonu inicjacji translacji wynosi 49,6% G lub C, przy obserwowanym / oczekiwanym stosunku dinukleotydów CpG 0,27; 56), wzbogaca się o elementy wiążące wszechobecnie eksprymowane czynniki transkrypcyjne, w tym CRE, aktywujące białko a (AP-1) i indukowalny niedotlenienie czynnik (HIF-1). Continue reading „Niedotlenienie indukuje funkcjonalnie istotny i translacyjnie skuteczny wariant mRNA neuronalnej syntazy NO ad 7”

Proteolityczne przetwarzanie dynaminy przez cytoplazmatyczną katepsynę L jest mechanizmem białkowo-nerkowej choroby nerek cd

Całkowite białka z rozpuszczalnych frakcji (S) i cząstek (P) analizowano metodą Western blotting. MRNA dla CatL zawiera kilka kodonów AUG (rysunek 2D). Po translacji z pierwszego AUG, CatL jest przetwarzany w celu uzyskania postaci lizosomalnej 30 kDa, zwanej pojedynczym łańcuchem CatL (Figura 2D, czarne strzałki). Jednak alternatywna inicjacja translacji z dalszej części AUG daje izoformę CatL pozbawioną lizosomalnej sekwencji targetowania (zwanej krótką CatL), która lokalizuje się w cytoplazmie (Figura 2D, czerwona strzałka, odnośnik 5). Aby sprawdzić, czy LPS indukuje ekspresję krótkiej CatL, przeprowadzono eksperymenty frakcjonowania subkomórkowego z użyciem hodowanych podocytów. Continue reading „Proteolityczne przetwarzanie dynaminy przez cytoplazmatyczną katepsynę L jest mechanizmem białkowo-nerkowej choroby nerek cd”