Zwiększone wspomaganie odporności adaptacyjnej przez proapoptotycznego mutanta Mycobacterium tuberculosis ad 5

Podążając za poziomami t-adrenera splenocytów H-2Kb obciążonego SIINFEKL w okresie 20 tygodni, zaobserwowaliśmy, że u myszy zaszczepionych. SecA2-OVA wystąpiła zwiększona faza ekspansji specyficznych wobec antygenu komórek CD8 + T, po których nastąpiła trwała faza podtrzymująca charakteryzowana przez zwiększone poziomy limfocytów T pamięci CD8 + (Figura 3). Mierzono również ekspresję liganda CD62 (CD62L) i CD44 na komórkach tetramer + w celu rozróżnienia między naiwnymi (CD44lowCD62Lhigh), pamięcią centralną (CD44highCD62Lhigh) i podzbiorami pamięci efektorowej (CD44highCD62Llow) (27). Zwiększenie długoterminowej ekspansji limfocytów T pamięci CD8 + do co najmniej 8 tygodni po szczepieniu pS2A22 było widoczne zarówno w podgrupach CD62Lhigh i CD62Llow, z tendencją sprzyjającą większej i bardziej trwałej ekspansji w populacji CD62Lhigh. Obserwowaliśmy również wyższą ekspresję receptora IL-7. łańcuch i niższa ekspresja zaprogramowanego receptora śmierci (PD-1) w ekspandowanych antygenowo specyficznych komórkach T CD8 + u myszy zaszczepionych p2A2A2 po 20 tygodniach (dane nie pokazane), zgodnie z generacją długowiecznej i funkcjonalnej nienaruszona populacja komórek T pamięci (28, 29). Figura 3 Wspomniane populacje limfocytów T w pamięci po immunizacji za pomocą. SecA2. Myszy C57BL / 6 zostały przeniesione adoptywnie z 5 × 105 splenocytów OT-1 24 godziny przed szczepieniem przez podskórne zakażenie H37Rv-OVA lub. SecA2-OVA. Zwierzęta uśmiercono 2, 4, 8 i 20 tygodni po szczepieniu, a splenocyty wybarwiono w celu 5-kolorowej analizy fluorescencji, stosując przeciwciała specyficzne dla tetrameru H-2Kb obciążonego SIINFEKL, obciążonego S1IN2, B220, CD62L i CD44. (A) Analiza FACS całkowitego B220. zdarzenia wśród 1,5 × 106 wszystkich limfocytów, pokazując proporcje wybarwienia komórek Thy1.2 + tetramerem. (B) Wykresy punktowe wykazują ekspresję CD44 i CD62L na komórkach bramkowanych do barwienia tetramerami, jak w A z reprezentatywnych myszy, które uśmiercono 2 tygodnie po zakażeniu wskazanymi szczepami bakteryjnymi. Wykresy pokazują wartości procentowe całkowitego B220. barwienie limfocytów tetramerem (Tet) i wyrażanie wysokiego lub niskiego poziomu CD62L w każdym punkcie czasowym po szczepieniu. Wypełnione kwadraty przedstawiają myszy zaszczepione za pośrednictwem seA2A2 i otwarte kwadraty myszy szczepionych H37Rv-OVAa. Każdy symbol oznacza średnią i SD dla grup 2 lub 3 myszy. Ochronna odporność przeciwko wirulentnemu szczepowi M. tuberculosis po szczepieniu pS2A2. W celu ustalenia, czy wzmocnione stymulowanie komórek T obserwowane za pomocą. SecA2 może zwiększyć jego skuteczność jako żywego szczepu szczepionkowego, przeprowadziliśmy badania immunizacji i prowokacji zaprojektowane do oceny potencjalnej skuteczności szczepionki. Myszy C57BL / 6, które były albo naiwne albo immunizowane 8 tygodni wcześniej przez iniekcję podskórną żywym pS2A2 lub BCG (szczep Pasteura) poddano prowokacji przez niskodawkową infekcję aerozolową wirulentną M. tuberculosis (szczep Beijing W / HN878). U naiwnych myszy, znaczny wzrost w płucach i rozsiewanie do śledziony wykryto w ciągu miesiąca od prowokacji. Przeciwnie, szczepienie pS2A2 i BCG znacznie zmniejszyło obciążenia prątkami M. tuberculosis w obu płucach i śledzionach myszy prowokowanych aerozolem w porównaniu z nieskutecznymi kontrolami po miesiącu po prowokacji aerozolem (Figura 4A). Ochrona wywołana przez immunizację. SecA2 była znacząco większa niż ta uzyskana przy szczepieniu BCG, jak zmierzono przez obciążenie bakteryjne w płucu (0,72-logowa redukcja w pSa2A2 w porównaniu z myszami szczepionymi BCG; P <0,001). Immunizacja za pomocą pA2A2 również wykazała bardziej przedłużony wpływ na kontrolę zakażenia M. tuberculosis w porównaniu z immunizacją BCG, przy czym obniżenie CFU było nadal widoczne w 5 miesięcy po prowokacji, gdy immunizacja BCG nie dawała już znaczących efektów. Co więcej, przeżywalność myszy z prowokacją M. tuberculosis zaszczepionych pSa2A2 znacznie przedłużyła się w porównaniu z myszami naiwnymi lub myszami zaszczepionymi BCG (Figura 4C). Badanie histopatologiczne płuc myszy immunizowanych szczepem BCG lub. SecA2 wykazało względnie łagodny stan zapalny z małymi i zwartymi ziarniniakami bogatymi w limfocyty, w porównaniu z myszami naiwnymi, które miały rozległe, źle zorganizowane zmiany ziarniniakowe (Figura 4B). Figura 4 Ochronna odporność przeciwko zjadliwej prowokacji M. tuberculosis u myszy po szczepieniu pS2A2. (A) Myszy C57BL / 6 zaszczepiono podskórnie solą fizjologiczną (naiwną) lub x 106 BCG lub pSa2A2 i prowokowano aerozolem 2 miesiące później za pomocą 50. 100 CFU wirulentnego szczepu M. tuberculosis Beijing / W (HN878). Wykresy pokazują średnie i odchylenia standardowe CFU M. tuberculosis w płucach i śledzionie po 1, 3 i 5 miesiącach po prowokacji dla grup 5 myszy, które były albo naiwne (białe słupki), zaszczepione BCG (szare słupki), lub. SecA2 zaszczepione (czarne słupki) [przypisy: koszt ubezpieczenia zdrowotnego, objawy głodu alkoholowego, kalafior wartości odżywcze ] [więcej w: koszulki ratownictwo medyczne, tobrosopt dex, koprolalia ] [podobne: koszulki ratownictwo medyczne, tobrosopt dex, koprolalia ]