Zwiększone wspomaganie odporności adaptacyjnej przez proapoptotycznego mutanta Mycobacterium tuberculosis ad 6

Płuca myszy szczepionych i poddanych prowokacji wirulentnym M. tuberculosis badano histologicznie i 3 miesiące po prowokacji. Bardziej nasilone, rozprzestrzeniające się zmiany w płucach z rozległym ziarniniakowym zapaleniem płuc i konsolidacją obserwowano u nieszczepionych myszy w porównaniu z myszami zaszczepionymi BCG lub (3 secA2. Oryginalne powiększenie, × 20. (C) Myszy C57BL / 6 zaszczepiono podskórnie solą fizjologiczną lub x 106 BCG lub pSa2A2 i prowokowano aerozolem 2 miesiące później z 50. 100 CFU wirulentnego szczepu Erdman M. tuberculosis. Myszy obserwowano codziennie w celu przeżycia przez rok po prowokacji. U zwierząt zaszczepionych BCG obserwowano umiarkowane wydłużenie przeżycia (P = 0,006 w porównaniu z grupą kontrolną naiwną, test logarytmiczny), i znacznie bardziej wyraźne wydłużenie przeżycia obserwowano u zwierząt zaszczepionych p2A2A2 (P = 0,0001 w porównaniu z naiwnością; P = 0,0062 w porównaniu z BCG). Zbadaliśmy także zdolność ochronną szczepienia a secA2 przy użyciu modelu prowokacji aerozolem u świnek morskich, gatunku żywiciela wysoce podatnego na M. tuberculosis. Zwierzęta, które były albo naiwne, albo immunizowane 2 miesiące wcześniej pf2A2 lub BCG, były prowokowane przez inokulację drobnoustrojami za pomocą małej dawki M. tuberculosis H37Rv. W i 2 miesiące po prowokacji świnki morskie immunizowane M. tuberculosis . secA2 wykazywały znaczne zmniejszenie CFU w śledzionach, płucach i śródpierścieniowych węzłach chłonnych względem kontroli naiwnych. Chociaż zwierzęta immunizowane BCG również wykazywały podobne zmniejszenie CFU w płucach i śledzionie, zwierzęta te wykazywały znacznie mniejszą redukcję obciążenia prącia w węzłach chłonnych śródpiersia niż obserwowano dla grupy immunizowanej pA2A22 (Figura 5A). Wyniki oceny patologicznej tkanek świnki morskiej były równoległe do liczby bakterii w tkankach (Figura 5B, Suplementowa Figura 4). Ponownie, różnice w węzłach chłonnych śródpiersia były uderzające, ponieważ były one znacznie powiększone w grupach naiwnych i immunizowanych BCG, ale wyglądały normalnie pod względem wielkości i wyglądu u zwierząt immunizowanych p2A2A2. Mikroskopowo, węzły chłonne zarówno naiwnych, jak i immunizowanych BCG zwierząt wykazywały znaczną reakcję ziarniniakową postępującą do zwłóknienia, która całkowicie zamazała normalną architekturę węzłów o 2 miesiące, podczas gdy węzły chłonne immunizowanych przeciwciałami p2A22 wydawały się normalne po miesiącu i wykazywały tylko małe obszary zwłóknienia w 2 miesiące po prowokacji. Podsumowując, wyniki te donoszą o 2 różnych zwierzęcych modelach szczepienia M. tuberculosis, a prowokacja wykazała, że pSaA2 było co najmniej równe BCG we wszystkich badanych wynikach i znacznie przekraczało BCG w niektórych miarach skuteczności, takich jak przedłużenie przeżycia i możliwość ograniczenia. rozszerzenie infekcji płucnej do regionalnego układu limfatycznego. Figura 5 Ochronna odporność przeciwko zjadliwej prowokacji M. tuberculosis u świnek morskich po szczepieniu pS2A2. (A) Nieoprzeżone świnki morskie Hartley zaszczepiono śródskórnie solą fizjologiczną, BCG lub (3 secA2 (n = 5 zwierząt na grupę) i poddano ekspozycji na działanie aerozolu 2 miesiące później, stosując 10. 30 CFU wirulentnego M. tuberculosis H37Rv. Wykresy przedstawiają SEM CFU M. tuberculosis w płucach, śledzionie i śródpierścieniowych węzłach chłonnych w i 2 miesiące po prowokacji dla nie naiwnych (białe słupki), zaszczepione BCG (szare słupki) lub (3 a2A2-zaszczepione (czarne słupki) zwierzęta (Liczba CFU uzyskana z minimum 3 i w większości przypadków 5 zwierząt, wyjątkiem była 2-miesięczna CFU śledziona dla zwierząt zaszczepionych BCG, w której z powodów technicznych uzyskano tylko zwierzę). (B) Ilościowa punktacja histopatologii wykreślona jako SEM z oceny rangowej dla grup świnek morskich zaszczepionych i prowokowanych, jak opisano w A. Obrazy przedstawiają reprezentatywne widoki małej mocy (x 25) wybarwionych H & E sekcji śródpierścieniowych węzłów chłonnych zebranych z każdej grupy po lub 2 miesiącach po prowokacji. Pręty skali: mm. * P <0,05, ** P <0,01,