Zwiększone wspomaganie odporności adaptacyjnej przez proapoptotycznego mutanta Mycobacterium tuberculosis cd

Ponadto, traktowanie komórek THP-1 nieodwracalnym specyficznym inhibitorem kaspazy-3 przed zakażeniem zmutowanym p-A2A silnie zmniejszało barwienie TUNEL, co wskazuje, że śmierć komórek makrofagów indukowana przez pzA2A2 była zależna od aktywacji tej dalszej kaspazy. Odwrócenie proapoptotycznego fenotypu M. tuberculosis. SecA2 przez przywrócenie sekrecji SodA. W przeciwieństwie do białek prątków, które przechodzą zależne od peptydu zależne od sekrecji zależne od secA1, SodA nie ma rozpoznawalnej N-końcowej sekwencji sygnałowej. Dlatego też uzasadniliśmy, że wydłużenie N-końca SodA o sekwencję sygnałową z białka prątkowego wydzielanego przez niezależny od secA2 szlak może przywrócić sekrecję SodA w zmutowanym pS2A2 i odwrócić jego fenotyp indukujący apoptozę. To zostało przetestowane przez rozszerzenie 5. koniec sekwencji kodującej WT SodA z sekwencją kodującą N-końcową sekwencję sygnałową Ag85b, główne białko M. tuberculosis, które jest wydzielane w sposób niezależny od secA1 i niezależny od secA2 (16). Ekspresja tego konstruktu w zmutowanym. SecA2 (. SecA2-. SodA) przywracała aktywność SodA w przesączu hodowlanym, a także odwracała indukcję apoptozy w zakażonych komórkach THP-1 (Figura 1D). Wynik ten wskazywał, że wydzielanie SodA prawdopodobnie było głównym zależnym od secA2 procesem zaangażowanym w hamowanie apoptozy komórek gospodarza. Delecja zwiększonej ilości komórek T CD8 + in vivo. Badania bakterii Salmonella typhimurium i innych bakterii wakuolarnych wykazują, że śmierć zainfekowanych komórek przez apoptozę prowadzi do wydajnego wychwytu antygenów bakteryjnych przez DC gospodarza i prezentacji krzyżowej do komórek T CD8 + ograniczonych MHC klasy I (8). Ponieważ antygeny M. tuberculosis są generowane w obrębie przedziału fagosomalnego, który jest odcięty od klasycznego szlaku cytoplazmatycznego przetwarzania antygenu, wyświetlanie tych antygenów w cząsteczkach MHC klasy I prawdopodobnie będzie zależało od pośredniej drogi prezentacji przez obserwacyjne DC, które może zająć i materiał procesowy uwalniany z makrofagów zainfekowanych apoptozą za pośrednictwem opisanej wcześniej drogi objazdu dla prezentacji krzyżowej (13-15). Opierając się na naszej obserwacji nasilonej apoptozy przez mutanta. SecA2 in vitro, przewidywaliśmy, że ten mutant powinien także ułatwiać przenoszenie antygenów do obserwujących DC i zwiększać stymulację limfocytów T CD8 +. W celu przetestowania tego in vivo, eksprymowaliśmy plazmid kodujący lipoproteinę 19-kDa M. tuberculosis poddaną fuzji na jej C-końcu z sekwencją wiążącą H-2Kb3 OVA (SIINFEKL) w WT M. tuberculosis (H37Rv-OVA), atenuowaną. mutanta M. tuberculosis z delecją regionu RD1 (24) (ARD1-OVA) lub mutanta a secA2 (a secA2-OVA) (dodatkowa Figura 2). Myszy zakażono klonami tych rekombinowanych prątków wykazujących ekspresję porównywalnego poziomu białka fuzyjnego lipoproteiny S1INFEKL o masie 19 kDa (Suplementowa Figura 2A), a komórki T CD8 + reagujące na SIINFEKL w ich śledzionach wyliczono za pomocą IFN-y. ELISPOT. Podczas gdy zakażenie H37Rv, H37Rv-OVA lub ARD1-OVA indukowało tylko poziomy tła IFN-y komórki tworzące plamki, infekcja a secA2-OVA indukowała znaczący, 10-krotny wzrost powyżej poziomów tła (Figura 2A). Jako kolejny ważny wskaźnik stymulacji komórek T CD8 +, oceniano specyficzną dla SIINFEKL aktywność cytolityczną za pomocą testu CTL in vivo. To ujawniło słabą aktywność cytolityczną u myszy zakażonych H37Rv-OVA, ale znaczny wzrost zabijania specyficznego dla celu u myszy zakażonych pSaA2AVA (Figura 2B). W przeciwieństwie do wyraźnego wzmocnienia odpowiedzi limfocytów T przeciwko epitopowi prezentowanemu przez MHC klasy Ip u zwierząt szczepionych szczepem. SecA2-OVA, IFN-y. Reakcje ELISPOT na surowe egzogenne białka prątkowe zawarte w oczyszczonej pochodnej białkowej M. tuberculosis (PPD) lub dominującym prezentowanym epitopie MHC klasy IIA Ag85B (Pep25) były podobne u zwierząt zakażonych WT i (3 secA2M. gruźlica (Figura 2C). Wskazuje to, że wzmocnienie stymulacji komórek T przez mutanta. SecA2 było ograniczone głównie lub wyłącznie do przedziału limfocytów T CD8 +. Figura 2 Udoskonalona aktywacja limfocytów T CD8 + in vivo przez pzA2A2. (A) Myszy zakażono iv wskazanymi szczepami bakteryjnymi, a śledziony zebrano po 7 dniach w celu ilościowego oznaczenia komórek T specyficznych dla SIINFEKL przez IFN-y. ELISPOT
[więcej w: malowanie włosów w ciąży, objawy głodu alkoholowego, lek doreta ]
[patrz też: vegantalgin, lek doreta, dieta przy dnie moczanowej tabela ]
[przypisy: vegantalgin, lek doreta, dieta przy dnie moczanowej tabela ]