Zwiększone wspomaganie odporności adaptacyjnej przez proapoptotycznego mutanta Mycobacterium tuberculosis czesc 4

Aktywność CTL mierzono in vivo przez przeniesienie mieszaniny śledzionowego CFSElow z SIINFEKL i nie splenionych splenocytów CFSEhigh do myszy biorcy 14 dni po zakażeniu wskazanymi bakteriami. Względne proporcje CFSElow i CFSEhigh zostały oszacowane ilościowo przez FACS w celu określenia procentowej specyficznej lizy. (C) Odpowiedzi limfocytów T CD4 + nie podlegały delecji SecA2. Siedem dni po zakażeniu wskazanymi bakteriami odpowiedzi limfocytów śledzionowych na oczyszczoną pochodną białkową (PPD) i peptyd-25 (Pep25) określono metodą ELISPOT. (D) Myszom Thy1.1 + B6.PL wstrzyknięto splenocyty Thy1.2 + OT-1 znakowane CFSE i zakażono wskazanymi bakteriami. Aktywację komórek T CD8 + oceniano 6 dni po zakażeniu rozcieńczeniem CFSE. Plamki punktowe pokazują reprezentatywne myszy, a wykresy słupkowe pokazują średnie i SD dla procentów niepodzielonych komórek w przenoszonej populacji dla 2 lub 3 myszy na szczep bakterii. (E) Zwiększona proliferacja limfocytów T CD8 + indukowana przez pzA2A2 została odwrócona przez ponowną ekspresję sekrecji SodA w szczepie. SecA2-ain sodA. Plamy kropek pokazują rozcieńczenie CFSE w przeniesionej populacji 6 dni po zakażeniu wskazanymi szczepami. Wykres słupkowy po prawej stronie pokazuje średnie i odchylenia standardowe procentów niepodzielonych komórek dla grup 4 myszy zakażonych każdym szczepem bakteryjnym. Wszystkie wyniki są reprezentatywne dla co najmniej 2 niezależnych eksperymentów. Aby bezpośrednio zwizualizować priming komórek T CD8 + z ograniczoną ekspresją MHC klasy I, reaktywnych z SIINFEKL w kontekście infekcji, wykorzystano adoptywne przeniesienie naiwnych komórek T znakowanych CFSE z myszy trans-reaktywnych TI-SIINFEKL / H-2Kbc-transgenicznych myszy OT-I ( 25). Myszom Thy1.1 + B6.PL wstrzyknięto znakowane CFSE Thy1.2 + splenocyty z myszy OT-I, a następnie zakażono prątkami eksprymującymi białko fuzyjne 19-kDa. SIINFEKL lipoproteiny. Aktywację i proliferację limfocytów T CD8 + oceniano przez rozcieńczenie CFSE w przeniesionej populacji w 5. 7 dni po zakażeniu (Figura 2D). Nieznaczną proliferację przeniesionych komórek T OT-1 obserwowano u myszy zakażonych H37Rv i obserwowano bardzo niewielką proliferację z zakażeniem H37Rv-OVA. Przeciwnie, infekcja. SecA2-OVA indukowała ogromny wzrost proliferacji przeniesionych komórek T, przy ogromnej większości komórek przechodzących 8 lub więcej podziałów. Odpowiedź na. SecA2-OVA była najbardziej wyraźna u myszy, które zostały adoptatywnie przeniesione ze stosunkowo niewielką liczbą (3 × 105) limfocytów T OT-1, zgodnie z wcześniejszymi obserwacjami na temat wpływu częstotliwości prekursorowej na ograniczanie ekspansji komórek T CD8 + ( 26). Przywrócenie secA2 przez komplementację (a-secA2-C-OVA) odwróciło efekt delecji secA2 na priming komórek T OT-1 (figura 2D). W przeciwieństwie do wyraźnych różnic w proliferacji limfocytów T OT-1 do infekcji szczepami ujemnymi przeciwko pozytywnym w stosunku do seA2, odpowiedzi limfocytów T CD8 + do lizatów tych samych szczepów wstrzyknięto podskórnie adiuwantem znanym z stymulacji krzyżowego szczepienia (QS-21) były podobne (dodatkowa figura 2C). Potwierdziło to, że epitop SIINFEKL był wytwarzany w porównywalnych ilościach i w potencjalnie immunogennej postaci przez wszystkie różne rekombinowane klony mykobakterii, chociaż wydajna prezentacja antygenu pochodzącego z żywych prątków do komórek T OT-1 wystąpiła tylko podczas zakażenia przez pałeczki | secA2. Ponieważ selektywna rekonstytucja wydzielonej aktywności SodA przez ekspresję Ain soda całkowicie odwróconej indukcji apoptozy przez mutanty a secA2 (Figura 1E), ocenialiśmy jej wpływ na stymulowanie i ekspansję limfocytów T OT-1 przez generowanie. SecA2-. SodA szczep wytwarzający białko fuzyjne SIINFEKL o masie cząsteczkowej 19-kDa (a-secA2-a-sodA-OVA). Infekcja a-secA2-a-sodA-OVA powodowała znaczny spadek ekspansji przejmująco przenoszonych komórek T OT-1 w porównaniu z pS2A2-OVA i był podobny pod tym względem do zakażenia WT H37Rv-OVA (Figura 2E). Wskazuje to na ścisłe powiązanie między wzmocnionym stymulowaniem komórek T CD8 +, utratą sekrecji SodA i niezdolnością bakterii do blokowania apoptozy zainfekowanej komórki gospodarza. Populacje limfocytów T w powiększonej pamięci po immunizacji za pomocą. SecA2. Ważnym punktem odniesienia dla pomiaru skuteczności szczepu szczepionkowego jest jego wpływ na generowanie długożyciowych komórek T pamięci. Ponieważ analiza FACS endogennych limfocytów T specyficznych dla OVA z użyciem tetramerów H-2Kb obciążonych SIINFEKL nie była wystarczająco czuła dla dokładnego oznaczenia ilościowego (dane nie pokazane), zastosowano adaptacyjne przeniesienie niskich liczb (5 x 105) komórek T OT-1 do zwiększyć częstotliwość prekursorów komórek T specyficznych dla OVA. Umożliwiło to dokładną ocenę ilościową specyficznych antygenowo komórek T CD8 + przez barwienie tetramerami u myszy zaszczepionych przez wstrzyknięcie podskórne H37Rv-OVA lub. SecA2-OVA
[hasła pokrewne: piramida zdrowego zywienia, czy kawa podnosi ciśnienie, różyczka objawy u dorosłych ]
[patrz też: aspargin ulotka, clotrimazolum ulotka, octenisept ulotka ]
[hasła pokrewne: aspargin ulotka, clotrimazolum ulotka, octenisept ulotka ]